芍根方安全实用性研究及相关药对配伍的中医药理论探求和药理学作用实验观察

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目的:研究芍根方的急性毒性,确定其安全范围,为临床安全用药提供依据;对比芍根方水煎剂与颗粒剂的药效学作用,为芍根方剂型转换提供实验参考;研究芍根方复方中不同药物配伍的药理学作用及相关中医药理论依据。方法:1使用不同浓度的芍根方给小鼠灌胃,观察小鼠的毒性反应,记录死亡情况,测定小鼠的最大给药量。2分别采用小鼠耳肿胀法、热板致痛法观察并比较芍根方不同剂型的抗炎消肿及镇痛作用。小鼠耳肿胀法:将80只雄性小鼠按体重随机分为8组,每组10只。A组:颗粒剂高浓度组;B组:颗粒剂中浓度组;C组:颗粒剂低浓度组;D组:水煎剂高浓度组;E组:水煎剂中浓度组;F组:水煎剂低浓度组;G组:阳性对照组(给予云南白药);H组:空白对照组(给予蒸馏水)。各组每日分别给药一次,每次给药体积均为0.2ml/10g,连续给药7天。末次给药后30min,将二甲苯均匀涂于各组小鼠右耳,每只0.02~0.05ml,15min后脱颈处死小鼠,用9mm鼠耳打孔器在左右耳同部位凿圆片,分别称重。以肿胀百分率(%)即(右-左)/左×100%为指标统计处理。热板致痛法:选用雌性小鼠,将热板测痛仪温度调节到55±0.5℃作为热刺激源,用秒表记录雌性小鼠自投入热板至出现舔后足的潜伏期时间(s)作为该小鼠痛阈值。给药前测定每只备用小鼠的痛阈,阈值小于5s或大于30s的剔除,筛选出符合实验条件的小鼠80只。24h后进行实验,将小鼠置于55℃的热板上,首先测定每只小鼠的基础痛阈,给药前测两次(间隔10min),取其平均值,然后按体重、基础痛阈值将小鼠随机分为8组,每组10只。A组:颗粒剂高浓度组;B组:颗粒剂中浓度组;C组:颗粒剂低浓度组;D组:水煎剂高浓度组;E组:水煎剂中浓度组;F组:水煎剂低浓度组;G组:阳性对照组;H组:空白对照组。分组24h后开始灌胃给药,各组分别每日给药一次,每次给药体积均为0.2ml/10g,连续给药7天(阳性对照组给予云南白药等体积,空白对照给予蒸馏水等体积)。末次给药1h后开始,分别于之后的第30、60、90、120min时测定小鼠痛觉反应时间,为防止足部烫伤,若痛阈值超过60s,即停止测试而按60s计。3采用小鼠耳肿胀法,通过比较各组小鼠耳肿胀率来反映芍根方中鱼腥草络石藤及乳香公英两药对的抗炎消肿作用及组间差异;采用热板致痛法,通过小鼠痛阈值提高程度来反映芍根方中乳香山豆根及乳香公英两药对的镇痛作用及组间差异(两种方法操作同2中所述);采用小鼠扭体法,通过观察不同组别小鼠扭体次数来反映芍根方中所选药对的镇痛作用及组间差异,并计算各组疼痛抑制率;分别运用化学比色法及TBA比色法检测小鼠扭体实验中各组血清NO与MDA含量,探求芍根方复方及所选药对的镇痛机制。小鼠扭体法:将80只昆明小鼠(雌雄各半),按性别、体重随机分为8组,每组10只。A组:芍根方复方组;B组:乳山低浓度组;C组:乳山中浓度组;D组:乳山高浓度组;E组:乳三低浓度组;F组:乳三中浓度组;G组:乳三高浓度组;H组:空白对照组。各组分别每日给药一次,每次给药体积均为0.2ml/10g,连续给药7天(空白对照组给予蒸馏水等体积)。末次给药1h后,腹腔注射0.6%冰醋酸o.1ml/10g,观察注射致痛剂后20min内各组小鼠扭体次数(伸展后肢、腹部内凹或臀部抬高),并做详细记录,以公式:(空白对照组扭体次数-各给药组扭体次数)/空白对照组扭体次数,计算各组疼痛抑制率。4运用中医药理论分析急性放射性食管炎中医病机治法,探求芍根方相关药对配伍依据。结果:1急性毒性试验小鼠未出现明显毒性反应,与对照组比较,体重变化差异不显著(P>0.05),最大给药量为460g/(kg·d),相当于60kg体重成人临床推荐剂量的180倍。2芍根方水煎剂与颗粒剂对小鼠耳肿胀均有抑制作用,并均可提高热板致小鼠疼痛阈值(P<0.05),同等浓度组间无差异(P>0.05);两种剂型不同浓度之间,高浓度作用优于中、低浓度(P<0.05);抗炎消肿方面,阳性对照组与两种剂型高浓度比较,无显著差异(P>0.05),镇痛方面,两种剂型高浓度组优于阳性对照组(P<0.05)。3所选两组药对中、高浓度组对小鼠耳肿胀有明显抑制作用(P<0.05),且鱼腥草络石藤组优于乳香公英组(P<0.05),芍根方复方对小鼠耳肿胀抑制作用最强;另两组药对中、高浓度组均可提高热板致小鼠疼痛阈值(P<0.05),且乳香山豆根组优于乳香三七组(P<0.05),芍根方复方提高小鼠痛阈值作用最强;芍根方复方组,乳山中、高浓度组,乳三高浓度组均能使疼痛模型小鼠扭体次数明显减少(P<0.05),其中复方组与乳山高浓度组,小鼠扭体次数减少更为明显(P<0.01),二者相比,复方组作用更加明显(P<0.05),同等浓度组间,乳山中、高浓度组疼痛抑制效果优于乳三中、高浓度组(P<0.05);复方组与乳山高浓度组小鼠扭体实验血清中NO含量与MDA含量明显降低(P<0.05),二者相比,复方组作用更为显著(P<0.05)。其余各组在数值上亦存在降低趋势,但无统计学差异(P>0.05)。同等浓度组间,乳山高浓度组与乳三高浓度组相比,前者小鼠血清中NO含量与MDA含量降低更为明显(P<0.05)。4放射性食管炎急性期中医病机特点为“热毒壅盛,瘀肿并重”,针对食管粘膜充血水肿的客观之征,提出当以解决“毒”“瘀”为重,而患者疼痛甚至吞咽困难的主观之象,则当以缓解“痛”“肿”为要。本研究所选药对中,鱼腥草络石藤及乳香公英解毒祛瘀,乳香分别与山豆根、三七相配,消肿止痛,既符合“七情和合”的配伍原则,亦融入“中医病机为据、中西结合”的“多元化”配伍思想。结论:1芍根方的临床剂量服用安全。2芍根方水煎剂与颗粒剂型在抗炎消肿、镇痛作用方面无明显差异;与云南白药相比,芍根方高浓度组作用显著。3芍根方所选取四组药对中,鱼腥草络石藤组与乳香公英组均有不同程度的抗炎消肿作用,但鱼络组优于乳公组;乳香山豆根组与乳香三七组均有不同程度的镇痛作用,但乳山组优于乳三组;四组药对所观察的相应的药理学作用与复方相比,作用较弱;不同药对之间量效关系,高浓度组均优于低、中浓度组;芍根方复方及所选药对镇痛机制,可能与其可降低血清中NO及MDA含量有关。4芍根方中所选取研究的药对配伍合理,契合相关中医药理论。
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