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基因组改组技术是建立在原生质体融合技术基础之上的一种菌种选育新技术。灰黄霉素(gruseifykvub,GF),高产菌株荨麻青霉(Penicillium urticae Bainier)发酵周期较长,增加了生产成本和生产周期。本研究拟通过基因组改组技术,以筛选出发酵周期较短或效价较高的荨麻青霉菌株。
本研究的主要结果如下:
(1)探索了荨麻青霉原生质体的高效制备以及再生方法:采用0.6 mol/L NaCl作为渗透压稳定剂,菌龄为28℃培养20小时,0.01mol/L DTT预处理0.5小时,0.7%纤维素酶+0.7%蜗牛酶+0.5%溶菌酶28℃酶解3.5 h,PDA高渗双层培养基平板分离。结果表明原生质体的产量达到2.09x106个/ml,再生率达到21.2%:
(2)通过对诱变条件的探讨确定了最佳诱变方案,对原始出发菌株的诱变采用UV与NTG复合诱变处理的方法,先用254 nm波长紫外线诱变处理150秒,再用1毫克/毫升的NTG溶液诱变处理35分钟。结果获得了形态与原始菌株不同的诱变株,经平板抑菌试验筛选出抑菌效果比出发菌株更好的3株诱变菌株,基本达到了预期的效果;
(3)使用30%的PEG 4000做助融剂,在30℃下作用5分钟,通过两轮递推式原生质体融合,对融合菌株进行挑选,获得了发酵效价得到提高的3株菌株,效价提高了约15%。RAPD分析表明,改组菌株的遗传组成与原始菌株相比存在差异。初步实现了选育目的。