论文部分内容阅读
黑色素合成中的关键酶——酪氨酸酶(EC 1.14.18.1)是一种双核铜离子氧化酶,是多酚氧化酶的一种,广泛存在于微生物、动植物以及人体中。酪氨酸酶催化黑色素合成中的两步限速反应:酪氨酸羟化成左旋多巴和左旋多巴氧化成多巴醌,因此成为调控黑色素合成领域的研究重点,关于酪氨酸酶及酪氨酸酶活性调控的研究日益受到重视,吸引了大量研究者的兴趣。本论文主要研究了黄檗叶中黄酮提取物(PLF)和黄柏苷对酪氨酸酶活性的影响。本文一方面通过酪氨酸酶与PLF中主要成分的分子对接,推测PLF对酪氨酸酶有一定的抑制作用,并进行了相关的验证实验。通过紫外分光光度法、荧光猝灭法等,我们发现PLF是可逆的混合型抑制剂,IC50为0.1mg/mL,抑制常数Ki和Kis分别为455.99mM和95.67mM。PLF能够使酪氨酸酶的内源荧光产生剂量依赖的荧光猝灭,但最大峰位波长没有明显变化,确定了PLF对酪氨酸酶的抑制作用。另一方面,我们发现黄柏苷在不同pH条件下均使酪氨酸酶的活性增加,也使酪氨酸酶的内源荧光产生了剂量依赖的荧光猝灭,pH 6.24下猝灭常数Ksv=9.144E3L/mol,扩散猝灭速率常数Kq为9.144E11L·mol-1·s-1;pH7.17条件下猝灭常数Ksv=11.49E3L/mol,扩散猝灭速率常数Kq为11.49E11L·mol-1·s-1,说明黄柏苷对酪氨酸酶的荧光猝灭是这两种物质形成复合物引起的静态猝灭。其后我们制备了黄柏苷软膏,利用5%H2O2脱色法建立白癜风小鼠模型,并进行初步的的治疗实验,发现模型组较对照组含黑色素的毛囊数减少了10.12%,而黄柏苷组含黑色素的毛囊数较对照组减少了5.81%,说明了建模的成效及黄柏苷软膏对白癜风可能的治疗效果。本研究发现PLF是酪氨酸酶抑制剂,而黄柏苷对酪氨酸酶有一定的激活作用,与分子对接结果一致,为这两种物质在美白或白癜风治疗中的应用提供了一定的理论依据。