随着基因工程技术的成熟，运用基因工程方法制备重组蛋白代替天然提取物并筛选抗体以满足免疫学体外诊断原料需求，在诊断试剂领域得到了大力推广[1];大部分重组蛋白具有与天然蛋白性质相同的氨基酸组成及一级结构、相似的抗原表位及活性中心，故可作为天然活性蛋白的替代品进行免疫获得特异性抗体。　　 B型脑钠肽(BNP)具有控制水盐平衡、维持压力恒定、调节机体稳态的作用，主要受到压力和容量两种因素调节，进而能预示出心室容积扩大、左室舒张末期压增大，心室超负荷以及心脏损伤程度等一系列心血管异常情况。氨基末端B型脑钠肽前体(N-terminal fragment of brain natriuretic peptideprohormone，NT-proBNP)是B型脑钠肽前体(proBNP)形成BNP过程中产生的附属产物，从生物学意义方面分析，是一种无活性蛋白，因与BNP等摩尔数生成，故NT-proBNP与BNP同样可以作为一种心脏标志物[2]。由于NT-proBNP缺乏主动清除机制，在体液中的半衰期要长，浓度更大，更容易检测，并且检测样本更容易获得，因此其已经成为一种主要的心脏检测指标，自问世起则被称为“划时代的心衰标志物”。NT-proBNP检测试剂盒的研发不仅具有很高的科研价值、经济价值、还能推进诊断试剂国产化进程、打破国外垄断现象。　　 重组NT-proBNP蛋白采用大肠杆菌表达系统，优选大肠杆菌偏好密码子，选择融合蛋白标签重组表达增加蛋白稳定性，发酵条件优化后得到了较高的表达量[3]。两步亲和层析纯化目的蛋白，采用肠激酶酶切，将标签蛋白与目的蛋白分离并进行纯化，经过SDS-PAGE及罗氏全自动生化分析仪检测显示，纯度达到95％以上，具有较高的生物学活性。　　 经检测成功的重组蛋白具有天然蛋白相同的氨基酸序列及生物学活性，可用于免疫，制备单克隆抗体，经过免疫、融合、检测、筛选、克隆化、定株等过程，共获得47株单克隆抗体，其中包含两两配对抗体8株，配对抗体灵敏度均小于4ng(p≤0.05)，亲和力达到106以上(p≤0.05)。　　 选取两株灵敏度、亲和力、配对效果好的单抗，采用双抗体夹心的方法成功建立了酶联免疫检测试剂盒，对不同检测条件进行细化摸索，用辣根过氧化物酶标记单抗，标记率达到50％以上，采用TMB底物进行标本检测，该试剂盒检测灵敏度为l00-2000pg/ml，检测结果与罗氏化学发光法检测结果对比，秩和检验结果p=0.382(p≤0.05)，差异无统计学意义。