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目的：既往的临床观察发现脾虚证患者酸刺激后与刺激前唾液淀粉酶活性比值较正常人下降，但对其机理尚待深入研究。现代研究发现VIP作为一种重要的非胆碱能非肾上腺素能神经递质，在唾液蛋白分泌的调节中发挥重要作用。本研究观察利血平致脾虚大鼠酸刺激前后唾液淀粉酶分泌情况及其与VIP-cAMP通路功能、VAMP-8、SNAP-23蛋白表达水平的关系，并观察四君子汤对脾虚大鼠唾液淀粉酶分泌水平和上述指标的作用，探讨脾虚大鼠酸负荷下唾液淀粉酶分泌水平下降的相关病理机制。 方法： 1．采用利血平法复制脾虚大鼠模型，造模方法：SD雄性大鼠，皮下注射利血平0.5mg/kg，每日一次，持续8天，观察大鼠一般状况、检测尿D-木糖排泄率、大鼠酸刺激前后的唾液淀粉酶活性和唾液流量等指标，对利血平法致脾虚大鼠模型进行评价。 2．利血平致脾虚大鼠腮腺淀粉酶分泌功能改变及四君子汤的疗效观察：大鼠分为正常对照组和模型组。模型组大鼠用利血平法造模，造模结束后将模型大鼠分为四君子汤治疗组和非治疗模型组，四君子汤组给予10g/10mL/kg剂量四君子汤灌胃，正常组和非治疗组大鼠给予等量的水灌胃4周。记录大鼠一般状况，在造模结束时及给药结束后通过HE染色观察腮腺组织形态学改变、检测酸刺激前后腮腺淀粉酶活性、透射电镜下观察并统计酸刺激前后腮腺组织内的酶原颗粒数量等指标评价利血平致脾虚大鼠唾液蛋白分泌功能的改变及四君子汤的治疗作用。 3．利血平致脾虚大鼠腮腺组织 VIP、cAMP、PKA活性改变及四君子汤的干预作用：用放射免疫法检测各组大鼠酸刺激前后腮腺组织的VIP、cAMP含量、用 PepTag非放射性依赖于 cAMP的蛋白激酶检测系统检测酸刺激前后大鼠腮腺组织PKA活性，观察上述指标与唾液淀粉酶分泌情况的相关性以及四君子汤对上述指标的影响。 4．利血平致脾虚大鼠腮腺组织VAMP-8、SNAP-23蛋白表达水平的改变及四君子汤对其影响：用免疫组织化学法和western blotting法检测各组大鼠腮腺组织内的VAMP-8、SNAP-23蛋白表达，观察这些指标与唾液淀粉酶分泌情况的相关性以及四君子汤对这些蛋白表达的影响。 结果： 1．造模结束时，脾虚组大鼠出现明显体重下降、进食减少、毛色萎黄无光、倦怠懒动、眯眼、便溏、喜扎堆；尿D-木糖排泄率明显低于正常大鼠（P<0.05)；脾虚组大鼠酸刺激后的唾液淀粉酶活性以及刺激后与刺激前的唾液淀粉酶活性比值较正常大鼠相比有下降的趋势。 2．造模结束时，基础状态下，脾虚组大鼠腮腺组织内的淀粉酶活性与正常大鼠没有显著差异，酸刺激引起的腮腺内淀粉酶活性下降程度(刺激前-刺激后)显著小于正常大鼠（P<0.05)。透射电镜下观察，脾虚大鼠基础状态下的腮腺组织内酶原颗粒数目和正常大鼠相比没有显著差异，在酸刺激后，脾虚大鼠腮腺酶原颗粒数量显著高于正常大鼠（P<0.01)，酸刺激引起的腮腺内酶原颗粒数下降率显著低于正常大鼠（P<0.05)。经四君子汤治疗后，治疗组的大鼠一般状态恢复情况明显优于非治疗组大鼠，在给药第四周，中药组大鼠的体重显著高于非治疗组。中药组大鼠腮腺淀粉酶分泌水平恢复至与正常大鼠无显著差异，而模型组大鼠酸刺激后腮腺组织的淀粉酶活性和电镜下观察酸刺激后腮腺组织内残留的酶原颗粒数量仍高于正常大鼠。 3．恢复4周后，在酸刺激前，各组大鼠腮腺组织VIP含量无显著差异，酸刺激后，正常组大鼠腮腺组织VIP含量显著升高，模型组和四君子汤组大鼠腮腺组织VIP含量在酸刺激后也有一定程度的升高，但是升高的幅度低于正常大鼠，两组大鼠酸刺激后的VIP水平均显著低于正常大鼠，模型组酸刺激后和刺激前的VIP含量比值与正常组大鼠比呈现下降的趋势，中药组相对于模型组略高，但仍然低于正常大鼠。在酸刺激前，模型组大鼠腮腺 cAMP含量显著高于正常组（P<0.01)；酸刺激后，正常组和中药组大鼠腮腺组织cAMP含量显著升高，但是模型组大鼠则下降并显著低于正常大鼠（P<0.05)，刺激后与刺激前的比值显著低于正常大鼠（P<0.05），中药组在酸刺激前后与正常大鼠均无显著差异。正常组和中药组大鼠在酸刺激后腮腺组织PKA活性较刺激前均升高，而模型组大鼠腮腺组织PKA活性在刺激后较刺激前下降，模型组大鼠酸刺激后与刺激前的PKA活性比值显著低于正常组（P<0.01)，中药组与模型组相比有一定的恢复，但仍低于正常大鼠（P<0.05)。 4．与正常组相比，脾虚组大鼠腮腺组织VAMP-8蛋白表达没有显著差异，四君子汤治疗后VAMP-8表达显著升高，高于正常组和模型组大鼠（P<0.01)；与正常大鼠相比，脾虚大鼠腮腺组织 SNAP-23蛋白表达显著下降（P<0.01)；经四君子汤治疗后，SNAP-23表达有一定的恢复，但仍然显著低于正常组大鼠（P<0.01)。 结论： 1．利血平造模法复制的脾虚证大鼠模型，经一般症状观察，尿D-木糖排泄率检测，唾液淀粉酶分泌情况观察以及健脾方药四君子汤对其治疗作用的研究，结果表明该模型基本符合脾虚证动物模型要求，适用于脾虚证大鼠唾液蛋白分泌功能的研究。 2．利血平致脾虚模型大鼠在酸负荷状态下VIP-cAMP通路的功能较正常大鼠下降，且该通路功能与唾液淀粉酶的分泌水平呈现一定的相关性，四君子汤可以通过改善这一通路的功能从而恢复唾液淀粉酶的分泌功能。 3．模型组大鼠的腮腺组织VAMP-8蛋白表达和正常组相比没有显著差异， SNAP-23蛋白表达显著下降；四君子汤可以显著提高VAMP-8蛋白表达，但是对SNAP-23表达的作用不明显，SNARE蛋白表达水平的改变与脾虚证大鼠唾液分泌功能改变的相关性还有待于进一步的研究。