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黄曲霉毒素B1(AFB1)是由黄曲霉菌和寄生曲霉菌产生的剧毒代谢产物，能够致癌。黄曲霉毒素污染是食品安全领域的热点问题之一。产生黄曲霉毒素的黄曲霉菌和寄生曲霉菌广泛存在于玉米、小麦及稻米等农作物中，各国对黄曲霉毒素的污染限量标准均有严格的规定。因欧盟的限量标准严于我国卫生部制定标准，我国出口农产品多次因黄曲霉毒素超标遭拒。因此，建立AFB1的快速检测技术对于保障食品安全，提升我国农产品的出口具有重要意义。 本研究的目的是:1）建立基于纳米金标记单克隆抗体的AFB1直接竞争ELISA检测技术;2）研制AFB1胶体金免疫层析试纸条。 1、利用碳二亚胺法，制备了AFB1偶联抗原AFB1-BSA和AFB1-OVA，经ELISA和免疫印迹鉴定，偶联抗原制备成功，可应用于AFB1相关免疫学检测方法的建立。 2、基于AFB1单克隆抗体(Anti AFB1)，分别建立了常规间接竞争ELISA(ic-ELISA)、辣根过氧化物酶（HRP）标记Anti AFB1直接竞争ELISA(dc-ELISA)和基于纳米金标记的Anti AFB1-HRP直接竞争ELISA(nano-dc-ELISA)三种检测模式。常规ic-ELISA的半数抑制率(IC50)为0.41ng/mL，检出限(IC10)为0.12ng/mL;dc-ELISA半数抑制率为0.119ng/mL，IC10为0.037ng/mL;基于纳米金和HRP双标记抗体的dc-ELISA IC50为0.099ng/mL，IC10为0.017ng/mL。 3、nano-dc-ELISA具有检时间短、灵敏度高、检测下限低的优点，在玉米和面粉中平均加标回收率在87％-104％之间，变异系数均小于10％。对于实际样品的定量检测结果与高效液相色谱有相关性较好(R2=0.749)，能够用于实际样本中AFB1的快速准确定量。 4、建立了AFB1胶体金免疫层析试纸条，检测灵敏度可达到0.1ng/mL，特异性、重复性良好。对加标样品中AFB1的检测限为5μg/kg，通过对谷物和饲料样本的快速检测证实，该方法与进口ELISA快速检测试剂盒一致性良好，且该方法操作简单，适合现场快速筛查。 上述方法的建立为食品或饲料中AFB1的速检测试剂盒的研制奠定了基础。