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HBV是导致肝硬化和肝癌的主要因素。本文首先以羊抗人IgM、IgG、IgA和兔抗HBsAg多克隆抗体包被酶联反应板,分别捕捉乙肝患者血清中相应Ig复合的HBV(Dane)颗粒和游离Dane颗粒,再利用TaqMan探针荧光定理PCR技术对被捕捉的病毒DNA进行定量分析,从而建立了分别检测三类Ig复合HBV DNA和游离HBV DNA的免疫捕捉法定量PCR技术。通过阻断试验、中和试验、替代试验及对PCR扩增产物的核酸序列分析等试验证明,该技术特异性好、灵敏度高和重复性好。 采用该技术对118例慢性乙型肝炎患者血清标本进行检测,发现血清中游离HBV DNA含量明显高于三类Ig复合HBV DNA,说明其HBV DNA的存在方式是以游离为主,提示既往对血清HBV的研究仅代表游离HBV的状态。 考察各类HBV DNA与临床指标的关系,发现三类Ig复合HBV DNA含量在HBeAg阳性组极显著高于阴性组,且IgG复合HBV DNA含量在肝功能正常组显著高于异常组。提示在HBV DNA高度复制期,Ig对病毒的中和起着重要作用,尤其是IgG对HBV DNA的复合是机体自我保护、免除肝受损的一种重要手段。 针对HBV序列S区和C区,我们设计了两套引物,同时对患者各类HBV DNA进行套式PCR扩增,并进行序列分析,未发现与Ig复合HBVDNA有关的特异性变异,但发现各类HBV DNA存在不同的HBV感染谱。一类Ig在特定时间只能复合一种HBV感染株,而其游离HBV可能是多种HBV株的混合感染。不同的感染形式与疾病发展密切相关。 综上所述,本文采用创建的免疫捕捉法定量PCR技术,对慢性乙型肝炎患者血清游离和三类Ig复合HBV DNA进行了全面系统的研究,发现这些HBV DNA在乙肝疾病发展中具不同的病理生理意义,其结果为乙型肝炎慢性化机制的研究开辟了新思路和途径,为临床对乙型肝炎的诊断、预防和治疗提供实验依据和理论指导。