绵羊肺炎支原体黏附因子类p102基因的原核表达及免疫学特性研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:roc59516663
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绵羊支原体性肺炎是由绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoiae,MO)引发的一种高度接触传染性疾病,MO既可感染绵羊,也可感染山羊。本研究将MO内蒙古分离株(SZWQ株)复活后大量培养,提取其基因组。根据类p102的DNA序列设计特异性引物,大量扩增类p102基因。由于类p102基因序列中含有一个编码色氨酸的密码子TGA,在原核表达系统中TGA是终止密码子,而TGG编码色氨酸。所以在本试验中设计两对特异性引物,通过重叠延伸PCR法,将类p102基因的一个密码子TGA突变为TGG,从而使类p102基因在原核表达系统中顺利表达。表达产物经SDS-PAGE电泳检测。结果显示:蛋白分子量大小为58kDa,与预期目的蛋白的大小一致。将纯化后的融合蛋白经Western Blot检测。结果表明:所表达出的外源融合蛋白具有良好的反应原性。将纯化后的融合蛋白制作成疫苗,对小鼠进行动物免疫试验。小鼠经过4次免疫后,使用ELISA方法检测小鼠的血清中有无类p102的抗体产生。结果表明:通过4次免疫后,小鼠血清中均产生了针对类p102的抗体,且融合蛋白免疫组与PBS对照组相比差异显著(P<0.05)。本次免疫试验中融合蛋白的免疫效果采用吞噬调理试验和生长抑制试验来评定。吞噬调理试验结果显示:融合蛋白免疫组和PBS对照组相比差异极显著(P<0.01)。生长抑制试验的结果为弱阳性。
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