【摘 要】
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本文以tps1基因的cDNA，质粒pUC18和pET-30a(+)为研究基础，运用基因克隆技术，成功构建了重组表达载体pHHSM001和pHHSM002，使tps1基因在大肠杆菌中完成了功能表达，并对重组菌的抗逆
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本文以tps1基因的cDNA，质粒pUC18和pET-30a(+)为研究基础，运用基因克隆技术，成功构建了重组表达载体pHHSM001和pHHSM002，使tps1基因在大肠杆菌中完成了功能表达，并对重组菌的抗逆性进行了研究。1．将重组表达载体pHHSM001转化到大肠杆菌DH5α中，经IPTG诱导，外源基因tps1获得了表达。3个浓度的IPTG诱导结果表明，终浓度为0.7mmol／L的诱导剂量最好，表达的外源蛋白占菌体总蛋白的6.2％，其次是1mmol／L的终浓度较好，外源蛋白占菌体总蛋白的4％。以pHHSM002为表达载体，tps1基因在大肠杆菌BL21中也得到了高效表达，表达的目的蛋白占菌体总蛋白的17.8％。2．本文中用灵敏度较高的高压液相色谱(HPLC)来定性检测细胞内的海藻糖，结果表明，重组菌体内有一定的海藻糖含量，而对照菌株却没有海藻糖的产生。这说明tps1基因在大肠杆菌中不仅能表达，而且表达的蛋白具有生物活性，它的导入赋予重组菌合成海藻糖的能力。同时也暗示，海藻糖-6-磷酸合成酶是海藻糖合成途径中的关键酶，这一结论与前人的试验结果一致。
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