【摘 要】
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目的探讨重组慢病毒lenti-stat1,lenti-stat3-siRNA和lenti-stat1/stat3-siRNA对人胶质瘤U251细胞凋亡的影响及分子机制。方法构建重组慢病毒lenti-stat1,lenti-stat3-siRNA和lenti-stat1/stat3-siRNA载体并鉴定,将上述构建载体感染人胶质瘤细胞U251后,Real Time PCR方法与Western blo
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目的探讨重组慢病毒lenti-stat1,lenti-stat3-siRNA和lenti-stat1/stat3-siRNA对人胶质瘤U251细胞凋亡的影响及分子机制。方法构建重组慢病毒lenti-stat1,lenti-stat3-siRNA和lenti-stat1/stat3-siRNA载体并鉴定,将上述构建载体感染人胶质瘤细胞U251后,Real Time PCR方法与Western blot方法检测U251细胞STAT1和STAT3在mRNA与蛋白水平的表达,CCK-8方法检测U251细胞增殖情况,流式细胞术检测U251细胞凋亡及细胞周期情况,细胞划痕实验分析U251细胞迁移能力的影响,转录组测序分析其可能的分子机制。结果感染lenti-stat1和lenti-stat1/stat3-siRNA后,U251细胞STAT1的mRNA和蛋白表达水平均明显升高,感染lenti-stat3-siRNA和lenti-stat1/stat3-siRNA后,U251细胞STAT3的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,结果表明成功建立Stat1、Stat3-siRNA及其共表达Stat3-siRNA-Stat1重组慢病毒载体。与对照组比较,在敲除STAT3和过表达STAT1后,各实验组U251细胞增殖和迁移能力明显下降,凋亡率和G0-G1期细胞数明显升高,其中以重组慢病毒lenti-stat1/stat3-siRNA对U251影响最显著。转录组测序结果显示重组慢病毒lenti-stat1、lenti-stat3-siRNA和lenti-stat1/stat3-siRNA可引起U251细胞转录水平差异表达,其中共表达基因组lenti-stat1/stat3-siRNA独有的差异基因KEGG分析提示主要富集到FOXO信号通路中。结论1.重组慢病毒lenti-stat1/stat3-siRNA可以显著提高U251细胞中STAT1基因的表达和抑制STAT3基因的表达。2.重组慢病毒lenti-stat1,lenti-stat3-siRNA和lenti-stat1/stat3-siRNA可以有效抑制U251细胞的增殖和迁移,诱导其凋亡,其中以lenti-stat1/stat3-siRNA的抗U251细胞作用最明显,表明的下调STAT3和的上调STAT1具有显著地协同抗U251细胞生长作用。3.转录组测序结果分析提示激活FOXO信号通路可能是重组慢病毒lenti-stat1/stat3-siRNA相比单基因组lenti-stat1和lenti-stat3-siRNA更有效地抑制U251细胞增殖,诱导其凋亡的主要机制,但有待于进一步研究探讨。
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