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[背景]
组织工程心脏瓣膜是采用人工合成的材料,制成组织工程心脏瓣膜的支架,通过将体外扩增的自体活细胞种植在瓣膜支架上,细胞能够牢固黏附、生长,使其具有正常瓣膜组织的新陈代谢功能,最后应用于置换病变的瓣膜,在体发挥类似于正常瓣膜的功能。从理论上可以完全克服目前所用机械瓣膜和生物瓣膜的缺点,具有非常重要的临床运用前景。本试验探讨体外培养骨髓基质干细胞作为种子细胞,种植在有P4HB[聚β羟基丁酯]构建的心脏瓣膜上,旨在尝试为TEHV的研究提供合适的种子材料和瓣膜支架材料及增加种子材料与瓣膜支架材料黏附力的方法。
[方法]
1.取年轻健康狗髂前上嵴的骨髓,分离培养出骨髓基质干细胞,通过HE染色、Mallory染色、Masson染色及免疫组化鉴定为骨髓基质干细胞(MSC),取第三代细胞种植在有P4HB构建的心脏瓣膜上,培养两周后,用扫描电镜观察.
2.取6个规格相同的有P4HB[聚β羟基丁酯]构建的心脏瓣膜,气体消毒后分别置入不敷12孔板中,每2个为1组,前两组分别被Fn及poly-lysine包被,第3组空白对照。24小时后分别种植骨髓基质干细胞0.8×105个,24小时后在瓣膜背面再分别种植0.25×105个。2周后分别行MTT检测及扫描电镜检测。取不同数量的MSC,行MTT检测,制作不同细胞个数与MTT吸收光度的曲线。
[结果]
1.培养的细胞经细胞染色及免疫组化染色鉴定均支持其为MSC。
2.扫描电镜下,未种植细胞的瓣膜呈蜂窝状,孔径在89μm~150μm之间,适宜MSC的爬行;种植细胞后,瓣膜表面有大量MSC黏附,且爬行长入蜂窝状空径内
3.经Fn及poly-lysine包被的MTT吸光度OD值均数分别为0.12896及0.12033,均明显高于对照组0.11254,有统计学意义;Fn组与poly-lysine组相比亦有显著差异,前者高于后者。
[结论]
MSC和以P4HB为材料的瓣膜支架构建TEHV具有可行性.。Fn能有效的促进细胞在生物可降解的组织工程心脏瓣膜的粘附及增殖,是发展组织工程心脏瓣膜的一种优良的细胞粘附剂。