双氢青蒿素与阿霉素联用对人结肠癌肿瘤细胞耐药性的初步研究

来源 :广州中医药大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:joshcky
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目的:肿瘤多药耐药现象对肿瘤的治疗及预后有着重大影响。以HCT8/ADR人结肠癌耐药细胞为研究对象,观察双氢青蒿素与阿霉素对该细胞的增殖抑制、周期调控、诱导凋亡的影响,并对两药合用的协同作用机制进行了初步的研究,从而为中药联合化疗提供新的思路,同时为耐药肿瘤临床治疗提供实验依据及理论依据。方法:体外培养HCT8/ADR人结肠癌细胞,48h后收集细胞并调整好细胞数。其中①以5×103的密度铺种于96孔板。设空白对照组,实验组为阿霉素(DOX)组、双氢青蒿素(DHA)组、阿霉素和双氢青蒿素联用组,共计4组,并设置药物浓度如下阿霉素组(mg·L-1)为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10;双氢青蒿素组(mg·L-1)为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10;阿霉素和双氢青蒿素联用组:分别固定双氢青蒿素浓度为5 mg·L-1和10 mg·L-1,阿霉素(mg·L-1)浓度依次为0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5。在孵育24h后,用MTT法分别检测双氢青蒿素、阿霉素及两药联合对HCT8/ADR细胞的增殖影响并评估两药联合的作用效果;②以5×104的密度铺种于12孔板。设空白对照组,实验组为阿霉素(DOX)组、双氢青蒿素(DHA)组、阿霉素和双氢青蒿素联用组,共计4组,根据从①中得到的结果,调整药物浓度,选取阿霉素组浓度分别为0.05、0.1 mg/L;双氢青蒿素组10 mg/L。用流式细胞仪分析各组药物浓度对细胞周期及凋亡率的影响;并采用Western blot检测自噬。结果:1.与单用药相比,双氢青蒿素和阿霉素的联用分别在10 mg/L和0.1 mg/L时就能够使HCT8/ADR人结肠癌细胞的生存率降到50%以下。2.流式细胞术检测显示,双氢青蒿素和阿霉素联用可以诱导HCT8/TADR结肠癌细胞发生明显凋亡,与单用药组相比具有统计意义(P<0.05)。3.Western blot检测显示,双氢青蒿素和阿霉素联用能够上调自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和下调周期蛋白CyclinD1来诱导HCT8/ADR人结肠癌细胞发生自噬。结论:双氢青蒿素和阿霉素联用可以抑制HCT8/ADR的增殖,能够促使凋亡发生。通过上调自噬相关蛋白LC3-Ⅱ促使自噬体形成,通过自噬机制降解周期蛋白CyclinDl从而导致表达下降。表明双氢青蒿素能逆转耐药,恢复耐药细胞对化疗药物的敏感。
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