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猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2, PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS)的主要病原,并可导致机体产生严重的免疫抑制,严重影响养猪业发展。PCV2包含两个主要的开放性阅读框ORF1和ORF2,分别编码病毒复制相关蛋白(Rep)和病毒衣壳蛋白(Cap)。Cap蛋白为病毒的主要结构蛋白,在抗病毒感染免疫中起到重要的保护作用,并具有多个抗原表位。本研究以重组杆状病毒表达的重组Cap蛋白为免疫原,通过小鼠杂交瘤技术,成功制备6株抗PCV2 Cap的单克隆抗体,并对其识别的抗原表位进行了初步分析,研究内容包括：1.利用重组杆状病毒表达的PCV2 Cap蛋白免疫Balb/c小鼠,经3次免疫后取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,通过3次亚克隆,用间接ELISA方法筛选阳性克隆,获得6株能稳定分泌抗PCV2 Cap蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3H9/1H5、3H9/3C7、4A9/3E2、4A9/3D7、6G7/7B6和6G7/8D3。2.采用间接ELISA方法测得该6株杂交瘤细胞培养上清的效价分别为1：1024,1：1024,1：2048,1：2048,1：1024和1：1024；诱导同品系小鼠产生的腹水效价分别为1：204800,1：204800,1：1310720,1：1310720,1：163840和1：163840。体外连续培养60d,传代20次,分别取第5、10、20代的培养上清,检测其抗体效价,结果基本一致。亚类鉴定结果显示,3H9/1H5、3H9/3C7、6G7/7B6和6G7/8D3为IgG1型,4A9/3E2和4A9/3D7为IgG2b型,所有单抗的轻链均为K型。Western blot分析结果表明,6株单抗均能与重组Cap蛋白和纯化PCV2粒子发生特异性反应。IFA鉴定结果表明,6株单抗均可与PCV2毒株产生特异性反应,能够识别病毒天然结构蛋白。3.通过对6株单抗的识别位点进行初步分析,发现它们针对3个不同的抗原表位,其中3H9/1H5与3H9/3C7、4A9/3E2与4A9/3D7、6G7/7B6与6G7/8D3的识别位点相似。以原核表达的5种截断重组PCV2 Cap蛋白(CapA:51-150aa,CapB:51-200aa, CapC:51-233aa, CapD:101-200aa, CapE:101-233aa)为抗原,通过Western blot分析进一步鉴定这些单抗的识别位点,发现4A9/3E2与4A9/3D7的抗原表位位于101-150aa；而其余4株单抗(3H9/1H5、3H9/3C7、6G7/7B6和6G7/8D3)与原核表达的5种蛋白均不反应,其分泌抗体可能识别PCV2 Cap蛋白的天然构象表位或者1-50aa区域,从而为PCV2诊断、致病机理及Cap蛋白功能的研究提供了有用工具。