冻绿果实中黄酮提纯及抗氧化性研究

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冻绿(Rhamnus utilis),是鼠李科鼠李属的一种绿色灌木或小乔木。冻绿果实具有清热解毒,泻下杀虫,止咳祛痰的功效。我国部分地区将其果实和叶片等用来助消化、解酒、保肝、降酶、抗病毒等民间应用。20世纪中后期,国内外学者对鼠李属中多种植物的化学成分及药理作用进行了深入研究。但冻绿种的化学成分鲜有报道。由于缺乏相关的研究基础,冻绿没能作为药物普及使用。本研究对冻绿果实的提纯及抗氧化性研究活性进行分析;优化冻绿果实中黄酮类化合物的超声辅助提取工艺,以最大限度提高黄酮提取量;针对初步提取的黄酮溶液纯度低,影响冻绿果实黄酮的抗氧化效果的问题,采用大孔吸附树脂对乙醇粗提液进行纯化并确定最佳纯化工艺参数;最后评价其抗氧化活性。研究旨在为该植物在新型药物及保健品的开发等方面提供理论依据。主要研究内容及结果如下:(1)用响应面分析法优化冻绿果实中黄酮的超声波辅助提取工艺。以510 nm处的吸光值为指标,在液料比、乙醇浓度、提取时间和提取温度4个单因素试验基础上,通过中心组合试验设计原理确定了冻绿果实黄酮的超声辅助提取最优的工艺参数。结果表明,提取工艺优化条件为液料比30 mL/g、乙醇浓度50%、提取温度22℃、提取时间50 min。在此条件下,冻绿果实中黄酮提取量可达60.36 mg/g,与理论值60.25 mg/g基本吻合。(2)通过静态和动态吸附试验对纯化黄酮常用的四种大孔树脂进行筛选,确定用大孔吸附树脂HPD100最适合对冻绿果实黄酮类化合物进行纯化。其最优的纯化工艺参数为:上样液质量浓度为0.3 mg/mL,上样液PH为2-3,上样流速为2 mL/min,上样液体积为40 m L,冲洗水量为3 BV,洗脱液浓度为80%乙醇溶液,洗脱速度为2 mL/min,解吸液用量为40 mL。经过大孔吸附树脂HPD100纯化过的冻绿果实黄酮类化合物平均回收率高达94.23%。(3)以提取纯化后的黄酮水溶液为材料,采用普鲁士蓝法、DPPH自由基清除试验测定了冻绿果实黄酮水溶液的总还原能力。结果显示:在普鲁士蓝法、DPPH自由基清除试验中,冻绿果实中黄酮类化合物的还原力都明显高于维生素C的还原力,这表明冻绿果实中的黄酮类化合物具有较强的抗氧化能力。
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