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维吉尼亚链霉菌IBL-14(S.virginiae IBL-14)是本实验分离筛选出的一株能有效降解薯蓣皂素等甾体化合物的新型菌株。前期的研究工作,表明其代谢途径中有2个新颖的反应,C25位叔碳羟基化和C6位的甲氧基化。本课题致力于研究C6位的甲氧基化反应。通过对维吉尼亚链霉菌IBL-14的全基因测序结果的分析和筛选,推测IBL-14中的咖啡酰辅酶A氧甲基转移酶可能参与C6位的甲氧基化反应。因此研究该系列的酶,对S.virginiae IBL-14代谢薯蓣皂素途径中C6位甲氧基化反应机理的研究有重要意义。
本课题筛选了IBL-14中的三种咖啡酰辅酶A氧甲基转移酶基因进行研究,取得的成果如下:
(1)成功构建了宿主为Escherichia coli JM109(DE3)三株咖啡酰辅酶A氧甲基转移酶重组菌株,并通过投加底物咖啡酸,对发酵产物的分析鉴定了其活性和功能。
(2)对其酶学性质进行了生物信息学分析,氨基酸组成,等电点和分子量,疏水性,二级和空间结构的预测以及构建了系统进化树。
(3)对模拟得到的结构进行分子动力学模拟优化。
综上所述,本论文研究了S.virginiae IBL-14中的咖啡酰辅酶A氧甲基转移酶的酶学性质,致力于揭示C6位的甲氧基化反应作用机理。