低温脂肪酶的筛选、纯化及特性研究

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脂肪酶是一种特殊的酯键水解酶,它可作用于甘油三酯的酯键,使甘油三酯降解为甘油二酯、单甘油酯、甘油和脂肪酸,催化解脂、酯交换、酯合成等反应,广泛应用于油脂加工、食品、医药、日化等工业,是重要的工业用酶之一。低温脂肪酶可在低温与常温下较好地发挥活性,在环境治理、敏感化合物合成、生物医药领域等有良好的应用前景,近年来在手性化合物的有机合成中应用日趋增多,已引起人们的广泛关注。作者从福州某农场取样,经三丁酸甘油酯平板分离筛选共获得8株脂肪酶产生菌。基于16srDNA序列分析,运用ClustalX与MEGA4.0构建16S进化树,初步将这8株菌分为两大类:RT1、RT3、RT7、RT19、LT4为假单胞菌属,RT4、RT6、RT9与醋酸不动杆菌属分类地位相近。RT7是一株碱性脂肪酶产生菌,对其产酶培养基碳氮源成分进行优化,其产碱性脂肪酶的能力从原来的14.1U/ml提高到31U/ml,获得适宜该菌产酶及纯化的培养基配方。采用硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow及Sephacryl S-100等层析技术对RT7脂肪酶进行了分离纯化,获得了纯化的脂肪酶(简称PL-7),初步研究了温度、pH对该酶的影响,酶的稳定性,酶的抑制剂和激活剂,酶的催化必需基团,酶的底物特异性等理化性质,结果表明该脂肪酶表观分子量为44KD,其产生的脂肪酶在低温及碱性条件下有较好的活性,该酶在60℃下保温半小时仍保留有93%的活性,是一株低温碱性脂肪酶并具很强的耐高温性。
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