【摘 要】
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宫颈癌是女性的第一高发肿瘤,死亡率极高,现已明确HPV(humanpapillomaviruse)是其致病因子。HPV疫苗研究为其防治带来了曙光,目前已上市的HPV疫苗虽已取得一定的临床疗效,但仍然存
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宫颈癌是女性的第一高发肿瘤,死亡率极高,现已明确HPV(humanpapillomaviruse)是其致病因子。HPV疫苗研究为其防治带来了曙光,目前已上市的HPV疫苗虽已取得一定的临床疗效,但仍然存在着许多不足。其中,仅能抑制少数高危型HPV感染是最主要的缺陷之一。
HPV次要衣壳蛋白L2与宫颈癌的关系密切,同时L2肽段在所有HPV型别均有表达,虽然免疫原性较弱,但具有很强的序列保守性,可望交叉免疫多种型别的HPV病毒感染,所以HPVL2肽段为基础的集预防与治疗为一体的疫苗有着极大的优越性和潜力。
本研究拟制备重组HPV58L2(minorcapsidproteinofhumanpapillomavirustype58)及其单克隆抗体,或可为将来HPV预防性疫苗的进一步研究和应用提供基础。
为制备国内极度高发的HPV58(感染率仅次于HPV16)的重组次要衣壳蛋白,本研究以具有可溶性融合伙伴编码基因的质粒pGEX-KG和pET32a,为原始载体,构建了表达载体pGEX-KGV-HPV58L2、pET32a-HPV58L2,转化筛选后,工程菌通过培养、过夜裂解、包涵体洗涤、溶解、纯化、复性得到了纯度较高的可满足免疫小鼠和鉴定抗体免疫学功能的具有不同标签的两种的重组蛋白:GST-THROMBIN-STREPⅡ-ErK-HPV58L2和TrxA-HIS(6)-S.tag-ErK-HPV58L2。
2.为获得针对HPV58L2的单克隆抗体,本研究采用传统的杂交瘤技术,获得了12株能够分泌表达与GST-THROMBIN.STREPⅡ-ERK-HPV58L2具有特异性免疫反应的杂交瘤细胞能株,通过腹水接种化扩大培养和纯化,获得了12株单克隆抗体,并对上述单克隆抗体的效价和特异性进行了进一步的研究。
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