益气化瘀化痰养阴法对肝纤维化大鼠肝组织结构与TGF-β1及其受体的影响

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研究背景:肝纤维化是由各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生,导致肝内弥漫性细胞外基质(ECM)过度沉淀的病理过程,作为一种慢性、进行性、弥漫性的肝脏病变,治疗不及时或治疗不当都可使其发展为肝硬化。肝纤维化是慢性肝病向肝硬化、肝癌发展的必经阶段。肝纤维化属于现代医学诊断名称,根据其临床症候特点,可归属于中医“胁痛、黄疸、痞积、臌胀、胁痛、癜瘕、积聚”等病范畴,其病机演变是一个动态变化的过程,即是由实而虚、由表及里、由聚至积、由气入血及络的病变过程,其最关键的核心病机为气虚血瘀,痰浊胶结。多年来,中医采用益气、化瘀、化痰、养阴等方法独立或配伍来治疗肝纤维化取得了较好的临床效果;但益气、化瘀、化痰、养阴四种治疗方法合用是否比单用更能取得好的治疗效果?这是中医界一直没有解决的问题,如何以更科学的手段和方法来揭示肝纤维化的中医治法规律,并应用这些规律更好地指导肝纤维化的中医临床治疗,具有重要的理论及临床意义。目的:观察益气化瘀化痰养阴法对四氯化碳(CCl4)+低蛋白高脂饮食+5%酒精饮料诱导的肝纤维化大鼠肝组织结构与TGF-β1及其受体的影响,探讨益气、化瘀、化痰、养阴法单剂与四法合剂治疗肝纤维化的疗效,为临床治疗肝纤维化提供更好的实验依据。方法:1.建立肝纤维化大鼠模型及干预:130只SD大鼠,随机分为7个组,包括:正常对照组(10只)、肝纤维化模型组(20只)、益气组(20只)、化瘀组(20只)、化痰组(20只)、养阴组(20只)、益气化瘀化痰养阴组(20只)。除正常对照组外,各实验组采用皮下注射四氯化碳+低蛋白高脂饮食+酒精饮料的方法制备肝纤维化模型。模型成功后,根据组别分别灌服生理盐水、益气、化瘀、化痰、养阴单剂与合剂等。于14周末,根据组织检测要求分别进行心脏灌注和直接取大鼠肝脏等方法制备标本。2.应用光镜、Masson三色胶原染色和电镜技术观察肝组织病理结构及超微结构的变化。3.采用RT-PCR及Western Blot方法观察各组TGF-β1及其受体的基因和蛋白表达变化。结果:1.与正常对照组比较,模型组大鼠肝组织明显纤维化,肝组织TGF-β1及TGF-β1R基因和蛋白表达明显升高(P<0.01);2.与模型组相比,益气、化瘀、化痰、养阴和益气化瘀化痰养阴法都可以降低肝组织内纤维化程度,降低大鼠肝组织TGF-β1和TGF-β1R基因和蛋白表达(P<0.01);其中,益气化瘀化痰养阴法作用明显优于其它各法(P<0.05)。结论:益气法、化瘀法、化痰法、养阴法、益气化瘀化痰养阴法均可降低肝纤维化大鼠肝组织内纤维化程度,改善肝组织病理结构与超微结构,但益气化瘀化痰养阴法作用更明显,其机理可能与降低大鼠肝组织TGF-β1和TGF-β1R基因和蛋白表达密切有关。
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