依达拉奉对大鼠再植断肢的保护作用

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目的:本实验通过建立大鼠断肢再植模型,检测依达拉奉对血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及骨骼肌线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性的影响及光镜、电镜下骨骼肌结构的改变,解明依达拉奉对大鼠再植后断肢的保护作用。方法:清洁级健康雌性SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只:S组假手术组,M组断肢再植模型组,E1组依达拉奉低剂量组,E2组依达拉奉高剂量组。M组:大鼠麻醉成功后固定,右后肢常规皮肤消毒后沿股血管走行方向纵行切开皮肤,显露并游离股动静脉及股神经,钝性分离各层组织,于右股骨中段水平切断所有股部肌肉至股骨,只保留血管。右后肢驱血后以血管夹夹闭右侧股动静脉,室温下放置3h,放松血管夹,形成再灌注,缝合肌肉、神经及皮肤。术野用生理盐水浸湿的无菌纱布覆盖。再灌注前各组均由尾静脉给予肝素钠1000U/kg。E1、E2组除与M组上述操作相同外,于再灌注前分别由尾静脉注射依达拉奉0.5mg/kg和1mg/kg。S组和M组给予等量的生理盐水。S组仅游离出股动静脉,旷置3h后缝合皮肤。每组于再灌注5h和24h分别经颈外静脉取血各lml,静置后离心,测定血清超氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)的含量。并于再灌注24h取右后肢腓肠肌,提取线粒体测定骨骼肌线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性的变化。另取右后肢胫前肌在光镜和电镜下观察骨骼肌的结构变化。结果:40只大鼠全部进入结果分析。1大体形态观察:S组右后肢肌肉、皮肤红润温暖。M组右后肢肌肉、皮肤颜色稍暗红,温度稍低。E1组右后肢外观改变较M组减轻。E2组右后肢外观较M组有明显的改善。2骨骼肌组织切片观察:S组肌纤维基本正常,间质无水肿,未见炎细胞浸润。M组肌纤维结构紊乱,崩解,血管扩张充血,间质水肿,有较多的炎性细胞浸润。E1组肌纤维轻度水肿,间质稍水肿,有炎细胞浸润。E2组间质稍水肿,肌间散在炎细胞浸润。3透射电镜观察:S组肌原纤维排列整齐,Z线清晰。线粒体嵴致密,膜完整,无肿胀。M组肌原纤维部分断裂,Z线较模糊,线粒体明显肿胀,嵴紊乱,部分空泡化。E,组肌原纤维排列较整齐,Z线稍模糊,含有较多的脂滴,线粒体部分空泡化。E2组肌原纤维排列较整齐,Z线较清晰,含有少量脂滴,线粒体部分空泡化。4血清SOD活性及MDA含量:血清SOD活性:与S组比,M、E1、E2组SOD活性均降低(P<0.05)。与M组比,E1、E2组SOD活性均升高(P<0.05)。与E1组比,E2组SOD活性升高(P<0.05)。再灌注24h时,M、E1、E2组SOD活性较5h时低。血清MDA含量:与S组比,M、E1、E2组MDA含量均升高(P<0.05)。与M组比,E1、E2组MDA含量均降低(P<11.05)。与E1组比,E2组MDA含量降低(P<0.05)。再灌注24h时,M、E1、E2组MDA含量较5h时高。S组再灌注24h时上述两指标与再灌注5h时比较差异无统计学意义(P>0.05)。5骨骼肌线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性:与S组比,M、E1、E2组Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶均降低(P<0.05)。与M组比,E1、E2组Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶均升高(P<0.05)。与E1组比,E2组Na+-K+-ATP酶. Ca2+-ATP酶升高(P<0.05)。结论:1依达拉奉可减轻大鼠肢体缺血再灌注的损伤,对再植后的断肢具有保护作用,且高剂量组优于低剂量组。2其机制可能是增高了SOD活性,降低MDA含量,提高骨骼肌线粒体内Na+.K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性。
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