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背景肺癌是肿瘤相关死亡的首要原因。肺癌可分为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)和小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)两大类,其中NSCLC占总肺癌病例的80-85%。大多数非小细胞肺癌患者就诊时已至晚期,手术难以根治,且术后易复发。放疗和化疗常作为术后的辅助手段,不能特异的杀伤肿瘤细胞,同时还产生较大的毒副作用。探索非小细胞肺癌治疗的新途径,尤其是从基因水平阐明非小细胞肺癌的发生、发展和演变机理,寻找有效的基因治疗的靶点是近年来研究的热点。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)是一类长度大于200个核苷酸但不编码蛋白质的RNA,曾被认为基因转录的“暗物质”,但目前发现lnc RNA具有重要的生物学功能,如调控细胞增殖、细胞周期、细胞分化、细胞凋亡等。除此之外,lnc RNA的异常表达与人类疾病密切相关,尤其在肿瘤方面。现已在肺癌、肝癌、乳腺癌、胃癌等多种肿瘤中发现lnc RNA异常表达,且这些lnc RNA主要参与肿瘤的发生、生长、侵润、转移、复发及耐药等过程,提示lnc RNA在肿瘤的发生发展过程中可能起到癌基因或抑癌基因的作用。有理由预测lnc RNA可能成为肿瘤诊断和判断预后以及治疗效果的一个新的标志物,同时lnc RNA可以成为一个新的肿瘤基因治疗的靶点。Wnt/β-catenin信号通路是目前肿瘤研究的热点之一。Wnt/β-catenin信号通路参与调控包括肺癌在内的多种肿瘤的发生、发展、转移等病理过程。课题组前期芯片检测结果显示,lnc RNA AK126698在耐药的肺癌细胞A549/DDP中比亲本细胞A549中表达更低,而Wnt/β-catenin信号通路的受体蛋白FZD8在耐药肿瘤细胞中高表达。同时,生物信息学分析结果显示FZD8是AK126698的潜在靶基因。这为进一步研究AK126698的作用机制奠定了良好的实验基础。然而,lnc RNA AK126698的临床意义及具体的分子机制还不清楚。目的观察AK126698在非小细胞肺癌肿瘤组织中异常表达的临床意义;研究AK126698对非小细胞肺癌细胞表型的影响及其分子机制;证明FZD8是AK126698的靶基因,并参与介导AK126698对NSCLC细胞增殖、迁移及肿瘤耐药的调控,以期为非小细胞肺癌的临床治疗寻找新的靶点和思路,并提供相应的理论和实验依据。研究方法:1、收集56例手术切除的非小细胞肺癌及其匹配的癌旁组织,用实时定量PCR法检测AK126698在非小细胞肺癌中的表达情况及其与患者临床病理特征之间的关系。2、通过慢病毒过表达载体和si RNA分别过表达和干扰AK126698在非小细胞肺癌细胞系(A549、NCI-H520)中的表达,并通过细胞增殖、迁移和凋亡实验研究AK126698对非小细胞肺癌细胞生物学功能的影响。3、分别采用实时定量PCR及Western Blot技术检测在非小细胞肺癌细胞中改变AK126698水平后FZD8的表达情况。4、利用Western Blot技术检测Axin1,β-catenin,c-myc,cyclin D1及E-cadherin的表达情况来证实AK126698对Wnt/β-catenin信号通路的影响。5、分别采用实时定量PCR及Western Blot技术检测非小细胞肺癌耐药细胞和亲本细胞中AK126698及FZD8的表达情况。6、通过增强非小细胞肺癌耐药细胞中AK126698的表达,来检测AK126698对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药的影响。7、通过抑制FZD8的表达,检测FZD8对非小细胞肺癌细胞对顺铂的影响。8、在非小细胞肺癌临床标本中,利用实时定量PCR法检测AK126698、FZD8及ERCC1的相关性,进一步证实AK126698、FZD8和化疗敏感性的关系。研究结果1、AK126698在非小细胞肺癌患者癌组织中的表达明显低于癌旁组织。同时,AK126698在肺癌细胞株A549、NCI-H520和H1299中均呈低表达。2、AK126698的表达水平与非小细胞肺癌的肿瘤大小及TNM分期密切相关,即肿瘤直径越大或TNM分期越高的非小细胞肺癌病例,AK126698的表达越低。3、上调AK126698的表达可降低A549和NCI-H520细胞的增殖和迁移能力和促进细胞凋亡;相反,干扰AK126698的表达可增加A549和NCI-H520细胞的增殖和迁移能力和减少细胞凋亡。4、FZD8是AK126698的靶基因。在非小细胞肺癌细胞中,上调(下调)AK126698水平可以抑制(促进)FZD8的表达。5、增强AK126698表达能抑制Wnt/β-catenin信号通路。6、AK126698在耐药非小细胞肺癌细胞(A549/DDP及NCI-H520/DDP)中比亲本细胞中低表达,而FZD8高表达。7、AK126698过表达能逆转A549/DDP及NCI-H520/DDP对顺铂的耐药。8、下调FZD8的表达能降低非小细胞肺癌细胞对顺铂的敏感性。9、在非小细胞肺癌ERCC1高表达组中AK126698呈低表达,而FZD8呈高表达,ERCC1为顺铂耐药的标志物。结论长链非编码RNAAK126698通过靶向FZD8进而抑制Wnt/β-catenin信号通路来阻止NSCLC细胞的增殖和迁移;AK126698通过抑制FZD8的表达从而逆转NSCLC细胞的顺铂耐药。这为肺癌的治疗提供了一定的理论依据和实验基础。