论文部分内容阅读
背景:子宫内膜异位症(EMs)是一种发生于育龄妇女的雌激素依赖性妇科疾病,其致病机制尚不清楚。该病虽是良性疾病,却具有恶性肿瘤浸润和转移的特点。nm23-H1是一个重要的肿瘤转移抑制基因,且受雌激素的调节。nm23-H1在抑制肿瘤侵袭转移过程中能通过RAS-RAF-MEK-ELK1通路、或P3K-AKT-NF-κB/AP-1通路、或RAS–RAC–MKK3/6-p38通路,降低MMP-9和MMP-2的表达,增强TIMP的表达,最终减弱肿瘤细胞的转移能力。研究表明在EMs异位内膜中MMP-2/9(金属基质蛋白酶2/9)的表达有显著性变化,为进一步明确nm23-H1与EMs发生发展的相关性及其是否通过调节MMP-2/9的表达促进EMs发生发展,通过q RT-PCR、细胞培养和si RNA转染等探索MMP-2,MMP-9基因表达跟nm23-H1及EMs的相关性及具体作用机制。通过以上实验研究,将基本明确nm23-H1在EMs发生中的作用,试图明确具体作用通路,为EMs的治疗提供新的靶标。目的:探讨nm23-H1和子宫内膜异位症之间的关系,试图探索nm23-H1介导的MMP-2/MMP-9表达异常在EMs发生发展中的作用机制。方法:取正常子宫内膜组织和子宫内膜异位症异位组织各10例,消化以后,分离培养内膜间质细胞。用10-6mol/L浓度的17β-雌二醇(C18H24O2,272.38)刺激,收集细胞,提取RNA,q RT-PCR测定nm23-H1及MMP-2、MMP-9的表达,探索雌激素对nm23-H1及MMP-2、MMP-9表达的影响。si RNA转染细胞,沉默nm23-H1表达,提取RNA,q RT-PCR测定nm23-H1及MMP-2、MMP-9的表达,探索nm23-H1低表达是否影响MMP-2、MMP-9的表达。结果:q RT-PCR检测目的基因表达:1.无任何处理下各基因表达情况(1)内异症组间质细胞和正常对照组间质细胞中的nm23-H1基因的m RNA表达水平分别为0.61±0.10,1.03±0.24。两者相比,内异症组nm23-H1基因的m RNA表达水平低于正常对照组,差异有统计学意义(t=4.58,P=0.00,P<0.05)。(2)内异症组间质细胞和正常对照组间质细胞中MMP-2基因的m RNA表达水平分别为1.17±1.39,6.87±8.96。两者相比,差异无统计学意义(t=1.77,P=0.10,P>0.05)(3)内异症组间质细胞和正常对照组间质细胞中MMP-9基因的m RNA表达水平分别为22.38±21.37,2.94±5.04。两者相比,内异症组MMP-9基因的m RNA表达水平高于正常对照组,差异有统计学意义(t=-2.52,P=0.04,P<0.05)。2.雌激素刺激后各基因表达情况(1)正常组:(1)正常组雌激素处理前和雌激素处理后间质细胞中的nm23-H1基因的m RNA表达水平分别为1.02±0.24,0.57±0.23。两者相比,雌激素处理后nm23-H1基因的m RNA表达水平低于雌激素处理前,差异有统计学意义(t=5.33,P=0.000,P<0.05)。(2)正常组雌激素处理前和雌激素处理后间质细胞中MMP-2基因的m RNA表达水平分别为6.87±8.96,7.71±14.84。两者相比,差异无统计学意义(t=-0.15,P=0.88,P>0.05)(3)正常组雌激素处理前和雌激素处理后间质细胞中MMP-9基因的m RNA表达水平分别为2.94±5.04,2.14±4.98。两者相比,差异无统计学意义(t=0.36,P=0.72,P>0.05)。(2)内异症组:(1)内异症雌激素处理前和雌激素处理后间质细胞中的nm23-H1基因的m RNA表达水平分别为1.01±0.17,0.49±0.26。两者相比,雌激素处理后nm23-H1基因的m RNA表达水平低于雌激素处理前,差异有统计学意义(t=4.72,P=0.000,P<0.05)。(2)内异症雌激素处理前和雌激素处理后间质细胞中MMP-2基因的m RNA表达水平分别为2.01±2.39,5.21±4.79。两者相比,差异无统计学意义(t=-1.69,P=0.11,P>0.05)(3)内异症雌激素处理前和雌激素处理后间质细胞中MMP-9基因的m RNA表达水平分别为2.24±2.01,2.53±2.12。两者相比,差异无统计学意义(t=-0.28,P=78,P>0.05)。3.siRNA转染后各基因表达情况(1)正常组:(1)正常组si RNA转染前和转染后间质细胞中的nm23-H1基因的m RNA表达水平分别为1..03±0.27,0.11±0.08。两者相比,si RNA转染后nm23-H1基因的m RNA表达水平低于si RNA转染前,差异有统计学意义(t=10.32,P=0.000,P<0.05)。(2)正常组si RNA转染前和转染后间质细胞中MMP-2基因的m RNA表达水平分别为8.00±13.08,10.45±17.49。两者相比,差异无统计学意义(t=-0.36,P=0.72,P>0.05)。(3)正常组si RNA转染前和转染后间质细胞中MMP-9基因的m RNA表达水平分别为2.46±4.53,5.26±6.28。两者相比,差异无统计学意义(t=-1.14,P=0.27,P>0.05)。(2)内异症组:(1)内异症组si RNA转染前和转染后间质细胞中的nm23-H1基因的m RNA表达水平分别为1.31±1.23,0.01±0.00。两者相比,si RNA转染后nm23-H1基因的m RNA表达水平低于si RNA转染前,差异有统计学意义(t=2.57,P=0.02,P<0.05)。(2)内异症组si RNA转染前和转染后间质细胞中MMP-2基因的m RNA表达水平分别为4.59±7.57,2.27±4.65。两者相比,差异无统计学意义(t=0.74,P=0.48,P>0.05)。(3)内异症组si RNA转染前和转染后间质细胞中MMP-9基因的m RNA表达水平分别为26.84±62.62,3.63±6.55。两者相比,差异无统计学意义(t=-1.04,P=0.33,P>0.05)。结论:1.与正常对照组比较,内异症组nm23-H1基因低表达,可能参与内异症的发生与发展。2.雌激素刺激可使nm23-H1基因表达下调。3.通过沉默nm23-H1基因表达,MMP2/9基因表达没有明显改变。