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本文以沪农灵芝1号为研究对象，用两阶段法深层发酵灵芝菌丝体，将获得的菌丝体用95％乙醇提取，石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，然后将乙酸乙酯萃取相和正丁醇萃取相分别利用柱层析和大孔树脂吸附技术分离纯化，得到了富含弱极性三萜的灵芝组分。 利用高速逆流色谱技术对各萃取相和主要洗脱组分中的三萜化合物进行分离纯化。以石油醚萃取相300mg为上样量，正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(7∶12∶11∶5，v/v/v/v)为溶剂体系，下相为流动相，流速2.0mL/min，温度25℃，转速900r/min，一次分离获得了灵芝酸T和灵芝醇B两个三萜化合物，其中灵芝酸T50.1mg，纯度为97.3％，灵芝醇B17.5mg，纯度为89.7％。此外，研究了循环高速逆流色谱技术分离灵芝三萜化合物的方法，正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(6∶10∶8∶4.5，v/v/v/v)为溶剂体系，下相为流动相，流速2.0mL/min，温度25℃，转速900r/min，一次进样30.0mg灵芝酸S和灵芝酸T的混合物，经过5个循环，有效地实现了灵芝酸S和灵芝酸T的分离，其中灵芝酸S8.4mg，纯度为90.8％，灵芝酸T19.6mg，纯度为95.5％。 以灵芝菌丝体醇提物的石油醚萃取相为原料，以固定相保留率为考察指标，研究了转速、温度、流速和上样量对制备灵芝酸T和灵芝醇B的影响，获得了最佳制备工艺:800mg样品上样量，正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(7∶12∶11∶5，v/v/v/v)为溶剂体系，下相为流动相，流速2.0mL/min，温度25℃，主机转速900r/min，一次分离得到灵芝酸T127.2mg，纯度为96.0％，灵芝醇B64.4mg，纯度为86.5％。 利用高速逆流色谱技术制备灵芝菌丝体中三萜化合物，比传统灵芝三萜的制备方法更简单，快速。本研究结果将为灵芝三萜类化合物进一步药理活性的深入研究提供物质储备，并为其他三萜化合物的分离纯化提供技术支撑。