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结肠癌(colon cancer)为严重威胁人类健康的主要癌种之一,不论是在世界范围内还是国内,其发病率和死亡率逐年上升,全面探索该病的发生机理于其诊治意义深广。胃肠富集Krüppel样因子(Gut enriched Krüppel like factor4,KLF4),可以广泛在人类多种组织和器官中表达,且其已经被发现与许多种类的恶性肿瘤的发病发展过程息息相关,是最近恶性肿瘤发生相关基因的研究热点之一。根据各文献报道总结,KLF4在胃肠、肝、膀胱及皮肤等组织的癌种中低表达,表现为对癌症的负向效能,在原发性乳腺导管、前列腺、口腔等组织与部位的恶性肿瘤中高表达,表现为肿瘤正向效能。VEGF作为当前研究最为深入的肿瘤血管促生因子,已被发现在几乎所有的实体肿瘤中均有过表达现象,被认为是已知的最为强大的肿瘤血管内皮生长促进要素,而且以其为靶点的药物也已在临床中广泛应用。有关结肠恶性肿瘤的大量研究已经证实,VEGF在结肠癌癌组织与正常组织中的表达水平有显著差异,且与结肠癌的浸润深度、有无淋巴结转移相关,可以作为预后指标。然而,有关KLF4及VEGF之间联系的研究国内外报道不多,尤其在结肠癌发生机制中,二者之间是否存在相互调控关系尚无报道。本研究初步探讨VEGF与KLF4在结肠癌中的线性关系,通过检测沉默KLF4基因后结肠癌HT-29细胞株VEGF蛋白的表达水平,探寻结肠恶性肿瘤发生的部分机理,探讨潜在的治疗靶点。目的:对结肠癌及癌旁组织中KLF4和VEGF蛋白表达情况行检测,比较KLF4和VEGF蛋白之间的相关性。进一步再通过检测沉默KLF4基因后结肠癌HT-29细胞株VEGF蛋白的表达水平,以证实KLF4在结肠癌中对VEGF的调控关系。方法:收集由秦皇岛市第一医院自2015年9月至2016年1月收治的经手术切除的结肠癌的癌组织标本及癌旁正常结肠黏膜组织标本每组各35例,以Western-blotting方法检测KLF4及VEGF蛋白含量的表达情况,以此来反应结肠癌组织及癌旁正常结肠黏膜组织中VEGF及KLF4的表达水平。对结肠癌HT-29细胞株进行细胞培养,然后利用KLF4-Si RNA瞬时转染从而下调结肠癌HT-29细胞中KLF4基因的表达,并培养沉默表达KLF4的结肠癌细胞株,再以Western-blotting方法检测细胞株中KLF4及VEGF蛋白表达情况,验证转染成功后再根据转染前后VEGF表达水平的变化,明确二者之间的调控关系,对实验数据进行统计分析。结果:1结肠癌组织Western-blotting结果1.1在结肠癌、癌旁组织中KLF4和VEGF蛋白表达情况:在癌组织中,KLF4的表达量(VEGF/GAPDH)为0.403±0.072,明显低于癌旁正常结肠黏膜组织的0.613±0.206,两项结果比较在医学统计学中具备显著性差异(t=-5.690,P<0.001);VEGF蛋白的表达量(VEGF/GAPDH)为0.499±0.149,癌旁组织为0.178±0.054,两项结果比较显示前者表达显著高于后者,在医学统计学中具备显著性差异(t=11.990,P<0.001)。1.2在结肠癌组织中KLF4和VEGF蛋白表达的相关性依Western-blotting中KLF4和VEGF蛋白的表达结果,经Pearson直线相关分析得出:KLF4与VEGF二者蛋白的表达量呈显著负相关,r=-0.713(P<0.001)。2沉默KLF4基因后,结肠癌HT-29细胞株Western-blotting结果2.1 HT-29细胞转染前后KLF4和VEGF蛋白表达情况:沉默KLF4后,提取结肠癌HT-29细胞中总蛋白,用Western-blotting方法检测两组细胞中KLF4及VEGF的表达含量:KLF4沉默实验组KLF4蛋白的表达量(KLF4/GAPDH)为0.165±0.017,明显低于对照组KLF4蛋白的表达量0.311±0.034,两项结果比较在医学统计学中具备显著性差异(t=-11.470,P<0.001);KLF4沉默实验组VEGF蛋白的表达量(VEGF/GAPDH)为0.816±0.042,对照组为0.630±0.083,两项结果比较在医学统计学中具备显著性差异(t=6.010,P<0.001)。2.2转染后HT-29细胞中KLF4和VEGF蛋白表达的相关性依Western-blotting中KLF4和VEGF蛋白表达结果,经Pearson直线相关分析得出:KLF4与VEGF蛋白的表达量呈显著负相关,r=-0.764(P=0.016)。结论:1在结肠癌中,KLF4蛋白的表达低于癌旁组织,对结肠癌可能为抑制效应;VEGF蛋白在结肠癌组织中的表达量则明显高于癌旁的正常组织,为结肠癌发生过程中的促进因子。2 KLF4-Si RNA瞬时转染HT-29细胞后,KLF4蛋白表达明显下调,说明瞬时转染成功。3 KLF4沉默后表达作用下降,VEGF蛋白的表达上调,二者的这种调控作用可能与结肠癌的发生及肿瘤血管形成有关,KLF4可能通过调控VEGF蛋白表达水平而调控结肠癌的发病过程。