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本文为了解我院近2年来肺炎患者下呼吸道标本中分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistantStaphylococcusaureus，MRSA)菌株中携带PVL基因的检出情况，以及这些产PVL毒素菌株对临床常用抗生素的耐药情况，同时分析产PVL毒素的MRSA所致肺炎的危险因素和临床特点，以指导临床有效地防治产PVL毒素的MRSA所致的肺部感染，因此进行了本课题的研究。
研究材料与方法：
1.MRSA的检测及药物敏感试验受试菌株：2004年7月-2006年3月间中山大学附属第三医院从住院并确诊为肺炎患者下呼吸道标本中分离的金黄色葡萄球菌(排除同一患者同一部位重复分离的菌株)。
菌株筛选：凝固酶试验及琼脂筛选试验筛选MRSA。药物敏感试验：采用2004年国际临床实验室标准委员会(NationalCommiteeforClinicalLaboratoryStandards，NCCLS)认可的纸片扩散法；测定菌株对下列14种抗生素药物敏感性，包括苯唑西林、青霉素、环丙沙星、莫西沙星、红霉素、克林霉素、四环素、复方新诺明、利福平、庆大霉素、氯霉素、头孢西丁、夫西地酸、万古霉素。
2.MRSA-PVL基因的检测实验菌株：76株经琼脂筛选试验筛选的MRSA菌株作为研究用菌，其中CA-MRSA20株和HA-MRSA56株，均符合诊断标准。
MRSA-DNA的提取：DNA提取采用丙酮破壁和碱裂解法。
PVL基因引物Luk-PV15’-ATCATTAGGTAAAATGTCTGGACATGATCCA-3’LuK-PV25’-GCATCAASTGTATTGGATAGCAAAAGC-3’引物参照Lina[54]等报道的核苷酸序列。
PCR扩增PVL基因、产物分析与测序：PVL基因经PCR扩增，扩增片断长度为433bp。产物采用琼脂糖凝胶电泳法，用凝胶成像系统观察结果并照相后切胶回收纯化，用双脱氧链末端终止法测序，结果与GenBank提供的PVL基因核苷酸序列进行对比以确定其基因来源。
3.PVL-MRSA肺炎的危险因素与临床特点分析病例与资料来源：采用成组病例-对照研究设计，将下呼吸道标本中分离到的PVL基因阳性MRSA肺炎患者全部列为研究对象，定为产PVL组。从同时期下呼吸道标本中分离到的PVL基因阴性MRSA所致的全部肺炎患者中随机抽取部分病例作对照，定为非产PVL组。查阅患者住院病历以收集有关资料，包括性别、年龄、基础疾病、侵袭性操作、雾化吸入、有无应用免疫抑制剂、入住重症监护室、白细胞计数等可能危险因素。同时收集其它一些临床资料包括有无混合感染、感染后住院天数、感染期间有无发热、气促、咳嗽、咯血、预后等。
统计分析方法：使用SPSS11.0统计软件，单因素分析采用计数资料X2检验或精确概率计算法。
研究结果：
1.菌种分离和鉴定2004年7月-2006年3月间分离收集的93株金黄色葡萄球菌主要来源于呼吸科和肝移植科。93株金黄色葡萄球菌中，76株为MRSA，占81.7％(76/93)。
2.耐药情况76株MRSA中，CA-MRSA和HA-MRSA各占26.3％、73.7％。两者均具有多重耐药性。两组对14种抗菌素耐药率均无明显差异。76株MRSA还可分为产PVL组及非产PVL组，两组均对多种抗菌素耐药。非产PVL组易对四环素产生耐药性，产PVL组易对夫西地酸产生耐药性。两组均对其余12种抗菌素耐药率均无明显差异。76株MRSA均对万古霉素敏感，没有发现中度敏感株和耐药株。
3.PVL基因的检出情况76株MRSA中10株获得了目的基因片断，其中CA-MRSA与HA-MRSA各有5株，阳性率分别为25％、8.9％。产物测序结果与基因文库中AB186917.1相似度达99％。这10株MRSA分离自30-86岁成年人。
4.MRSA-PVL基因与肺炎关系研究10例产PVL组及50例非产PVL组两组计数资料的单因素分析结果显示，两组在发病年龄、基础疾病等危险因素方面没有显著性差异，而在临床特征方面，10例产PVL组中出现气促、低血压、心率快、咯血比例分别为10/10、4/10、4/10、2/10，并且死亡率高达30％。而50例非产PVL组中出现气促、低血压、心率快、咯血比例为9/50、3/50、3/50、1/50，死亡率为6％。10例产PVL组白细胞总数升高不明显。
研究结论：
1.本院MRSA的耐药情况比较严重，CA-MRSA的耐药情况也较高。目前，万古霉素仍是治疗MRSA感染，包括携带PVL基因的MRSA感染的首选药物。
2.本院存在携带PVL基因的MRSA菌株，主要是CA-MRSA，这些菌株均分离自成年人。
3.产PVL-MRSA肺炎与非产PVL-MRSA肺炎具有相同的危险因素。
4.携带PVL基因的MRSA肺炎患者的临床特点有发热、气促、心率快、低血压，偶有咯血，白细胞升高较不明显，部分患者病情危重，死亡率高，预后不良。