Wnt/β-catenin信号转导通路在人参多糖诱导人鼻咽癌细胞凋亡中所起作用的实验研究

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ewenxj860411
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目的:观察人参多糖(Ginseng polysaccharide, GPS)对人鼻咽癌细胞CNE-2的增殖和凋亡的影响以及可能的机制探讨。方法:CCK8法观察人参多糖对人鼻咽癌CNE-2细胞生长的影响。取对数生长期的CNE-2细胞,用不同浓度人参多糖(GPS)0、0.1、0.2、0.3、0.4g·L-1分别作用48小时后,流式细胞术检测其对CNE-2细胞凋亡的诱导作用;Hoechst-33258染色和电镜观察细胞的形态改变。Real-time PCR检测细胞β-catenin mRNA的表达。采用免疫荧光染色检测细胞中β-catenin,TCF4蛋白定位及表达量的变化。Western blot检测细胞中β-catenin、Bcl-2、Bax蛋白的变化。结果CCK8法测得人参多糖能明显抑制CNE-2细胞的增殖,其抑制作用呈剂量、时间依赖性,GPS处理细胞48h的IC50为0.39g·L-1;浓度分别为0.1、0.2、0.3、0.4g·L-1的GPS作用人鼻咽癌CNE-2细胞48小时后细胞凋亡率分别为5.69±0.29%、10.3±0.63%、15.4±0.74%、35.7±1.86%,与对照组2.08±0.11%比较均有显著性差异(P<0.05);Hoechst-33258染色结果显示细胞凋亡特征。电镜下可见0.4g·L-1浓度的GPS诱导48小时后可使CNE-2细胞出现凋亡小体。Real-time PCR显示β-catenin mRNA表达明显降低。激光共聚焦结果显示人参多糖作用48小时后β-catenin和TCF4在胞核中表达明显减少,β-catenin表达区域由胞核向胞膜转移。Western blot结果显示经浓度梯度增加的人参多糖作用CNE-2细胞48h后,β-catenin和抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显减弱;而促凋亡蛋白Bax表达上调(P<0.05)。结论人参多糖可明显抑制CNE-2细胞增殖促进细胞。Wnt/β-catenin信号通路的受阻可能是GPS诱导人鼻咽癌细胞CNE-2凋亡的一个重要机制。
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