成纤维细胞有丝分裂同步化条件的摸索及HSF-2基因在绒山羊染色体中的定位分析

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:QQ38216943352177
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目前对于绒山羊Y染色体相关基因的研究较少,被定位在绒山羊Y染色体上的功能基因更是未见报道。为了丰富绒山羊的基因图谱,进一步扩大绒山羊的功能基因的定位,完善绒山羊Y染色体上的遗传信息,本实验选取了HSF-2基因,并对其进行定位。HSF-2基因主要在细胞循环、胚胎发育、细胞分化、生殖细胞的形成中发挥作用,对热刺激信号有耐受性,同时对调控机体生长、发育、分化的信号更为敏感。因此,了解HSF-2的基因相关信息对绒山羊的选育具有重要意义。实验通过体外培养成纤维细胞,制作细胞的染色体核型,并对核型进行分析,确定染色体悬液制备的最优条件。然后以HSF-2基因的质粒DNA标记探针,与绒山羊的成纤维细胞染色体标本进行杂交,从而对绒山羊的HSF-2基因进行物理定位。结果如下:(一)为了制备高质量的染色体标本,获得大量处于中期分裂相的细胞,对培养条件进行了摸索,结果如下:1、未经任何同步化处理,正常培养72h成纤维细胞,流式检测G2/M期所占比例仅为0.18%。2、运用秋水仙碱同步化处理的最适浓度是0.07ug/ml,最适作用时间是18h,得到的G2/M期最高比例为10.88%。3、运用nocodazole同步化处理的最适浓度是300ng/ml,最适作用时间是24h,得到的G2/M期最高比例为15.10%。4、比较发现对于绒山羊的成纤维细胞来说,nocodazole是更加适合的有丝分裂抑制剂。(二)对HSF-2基因的荧光原位杂交定位结果如下:本研究确定了HSF-2基因在内蒙古绒山羊的Y染色体上,其HSF-2基因属首次在绒山羊染色体上定位,进一步丰富了绒山羊的物理图谱。
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