肠道病毒71型中和抗体的制备

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肠道病毒71型(EV71)属于人类小核糖核酸病毒科肠道病毒属肠道病毒A种病毒,同柯萨奇病毒16型(CA16)一道,是引发手足口病(HFMD)的两种主要病原体。虽然手足口病的临床症状表现为轻微的发疹及发烧症状,但是EV71病毒的感染能够引发严重的神经疾病,如致死性脑炎,无菌性脑膜炎,急性松弛性麻痹,而CA16病毒的感染一般不会导致这些疾病。  EV71病毒主要感染小孩,特别是婴幼儿,其病毒于1969年在加利福尼亚的一个患有致死性脑炎的9个月大的婴儿中第一次分离得到的。手足口病在很多国家和地区中广泛流行着。近年来,在马来西亚、新加坡、台湾、日本、韩国、越南和中国大陆等东南亚和东亚的国家和地区经常会有手足口病的大爆发。目前由于没有合适的疫苗和抗病毒药物,还不能治疗由EV71感染导致的手足口病。在EV71感染过程中会发生依赖于抗体的病毒感染增强现象,这给疫苗治疗制造了一些困难。抗体这种被动免疫治疗的药物,也许是治疗手足口病的新希望。  在本实验中我们选用EV71-HM003207病毒株,该病毒株属于目前国内EV71感染病例中最常见的病毒C4亚型。用EV71活病毒、VP1-GST融合蛋白以及偶联上血蓝蛋白(KLH)的SP55、SP70和VP2-28三条中和线性表位肽作为三种免疫原成分免疫BALB/C小鼠,而后杂交瘤细胞技术结合酶联免疫吸附试验(ELISA),筛选到了14株强结合型单克隆抗体。在横纹肌瘤细胞(RD)和神经细胞(SKNSH)上检测单克隆抗体的中和保护作用,结果显示有四株单克隆抗体在RD细胞和SKNSH细胞上都表现出中和保护作用(2B6、12B6、6G5、2G12),有两株单克隆抗体只在SKNSH细胞中表现出中和保护作用(7E6、7G6),而仅有一株单克隆抗体仅在RD细胞上表现出中和保护作用(1G6)。本实验在细胞水平上建立检测抗EV71单克隆抗体的中和保护作用模型;获得的单克隆抗体可为后续人源化改造提供原材料;同时筛选到不同中和保护类型的抗体,可用于病毒致病机理的相关研究。
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