论文部分内容阅读
本论文以广西特色林产资源八角和提取挥发油后的八角渣为原料,系统进行了多糖、总黄酮、抗氧化剂和莽草酸等多个有效部位提取及其生物活性研究,大大提高了八角的综合利用率。其中,挥发油提取率为7%,多糖提取率为11%,总黄酮提取率为24%,莽草酸提取率为13%。提取挥发油后剩余的八角渣中,多糖提取率为7%,总黄酮提取率为17%。具体的工作有:开展了以溶剂法提取八角多糖和总黄酮成分的研究,优化提取工艺;分离、纯化并分析八角多糖的结构;考察八角多糖的体内抗肿瘤活性以及八角黄酮的降血压活性;从八角和八角渣中提取抗氧化剂,并采用多种体系评价其抗氧化性能;探索和改进八角莽草酸的提取纯化工艺。主要研究内容和取得的成果如下:
(1)建立了用3,5-二硝基水杨酸吸光光度法测定八角及八角渣中的总糖和还原糖含量的分析方法,操作简单方便,精密度、重现性良好。实验结果表明:八角经过一次水中蒸馏提取挥发油后,剩余的残渣中仍含有相当数量的、值得利用的总糖和还原糖(分别占原有含量的79.4%、31.4%)。通过正交试验法对八角多糖的提取工艺条件进行优化,各个因素对提取效果影响的主次顺序为提取温度>提取次数>料液比>提取时间,八角多糖的最佳提取条件为A3B2C1D2,即提取温度100℃、时间4h、提取料液比为1:11、提取次数2次,最佳提取率可达10.50%。
(2)利用DEAE-纤维素离子交换柱、凝胶SephadexG-100柱分离纯化了八角粗多糖,制得单一组分的八角精制多糖,HPGPC分析得到其分子量为52047。利用HPLC分析了八角多糖的单糖组成:由葡萄糖、树胶醛糖、木糖组成,含量分别为50.54mg/g、11.01mg/g、2.301mg/g,摩尔比为18.3:4.8:1。同时利用HPLC分析了八角中的单糖组分:由葡萄糖和果糖组成,含量分别为0.5730mg/g、9.461mg/g。利用红外光谱分析了八角多糖的结构。动物体内实验显示,八角粗多糖对S180肉瘤有一定的抑制作用,且粗多糖对免疫器官无抑制作用,毒副作用小。
(3)通过正交试验法分别对八角和八角渣中的总黄酮提取工艺条件进行优化,并进行了验证试验,结果显示运用最佳提取工艺,八角中总黄酮提取率为23.61%,八角渣中总黄酮提取率为16.81%,说明八角和八角渣中含有相当丰富的、可利用的黄酮类化合物。在考查八角总黄酮提取影响因素的正交试验中,四个因素对提取效果影响的主次顺序为提取次数>料液比>提取时间>乙醇体积分数。八角总黄酮最佳提取条件为乙醇体积分数为80%、料液比为1:30、提取时间120min、提取次数3次。在考查八角残渣总黄酮提取影响因素的正交试验中,四个因素对提取效果影响的主次顺序为乙醇体积分数>提取次数>提取时间>料液比。八角残渣总黄酮最佳提取条件为50%乙醇、料液比为1:10、提取时间120min、提取次数3次。选择动物慢性降压实验用于观察八角总黄酮的降压作用。结果表明,八角总黄酮对高血压大鼠无明显的降压作用。
(4)从八角和八角渣中提取抗氧化剂,并采用多种体系评价其抗氧化性能。结果表明:八角提取物对羟自由基、超氧阴离子和DPPH·均具有较强的清除作用,且在一定的浓度范围内其自由基清除率随浓度的增加呈上升趋势。其中对DPPH·的清除能力最强,各提取物的清除能力均强于抗坏血酸两倍以上。根据IC50值比较出各物质的清除能力大小,清除羟基自由基次序为:抗坏血酸>八角渣水提液>八角渣醇提液>八角醇沉液>八角水提液>八角醇提液;清除超氧阴离子自由基次序为:抗坏血酸>八角渣醇提液>八角渣水提液>八角醇提液>八角水提液>八角醇沉液;清除DPPH·次序为:八角渣水提液>八角渣醇提液>八角水提液>八角醇提液>八角醇沉液>抗坏血酸。实验方法不同,清除的自由基不同,各种物质表现出来的清除能力的大小次序也不尽相同。在实验所考察的三种清除自由基体系中,八角渣提取物的清除能力均强于八角提取物。
(5)探索和改进八角莽草酸的提取纯化工艺,确定了高效提取纯化莽草酸的工艺路线:微波提取——醇沉纯化——-柱层析法进一步纯化莽草酸。并建立了HPLC测定莽草酸的方法。醇沉法用于八角莽草酸的纯化少有见报道,效果明显。醇沉后不管是硅胶柱还是大孔树脂柱层析分离纯化莽草酸的效果都提高了,纯度都达到82%以上。建立了一种新的洗脱体系-乙酸乙酯和甲醇的混合溶剂,用于硅胶柱层析法纯化莽草酸,能将莽草酸与其近似物较好地分离,纯度达到94.6%,纯化的效果优于大孔树脂柱。
(6)通过对八角渣中总糖、还原糖、总黄酮和抗氧化能力的考察,证明八角渣中隐藏有丰富的资源,开展对其的研究有着重要意义。