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目的:观察漆姑草(HSJ)醇提物对人急性早幼粒白血病细胞(NB4)的增殖抑制及诱导分化的作用,并进一步探讨其与Notch信号通路的关系,为HSJ在白血病治疗方面的研究开发提供实验依据。方法:1.HSJ对NB4细胞分化诱导及相关基因表达的影响:以NB4细胞为研究对象,实验设不含药物的阴性对照组和HSJ组(15、30、60、120、240μg/mL),采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HSJ作用NB4细胞48 h后,NB4细胞的增殖抑制率;根据MTT结果,设阴性对照组和HSJ组(30、60、120μg/mL),采用瑞氏-吉姆萨(Wright-Giemsa)、透射电镜法观察NB4细胞形态;采用硝基四唑氮(NBT)还原实验法测定NB4细胞分化能力;流式细胞术检测NB4细胞周期分布;流式细胞术检测NB4细胞表面分化抗原CD11b和CD14细胞的表达率;Real time-PCR检测c-fos mRNA表达变化;Western-Blot法检测c-fos蛋白表达变化。2.HSJ对NB4细胞Notch信号通路的影响:Real time-PCR检测Notch1、Notch2、Jagged1、DLL4、c-myc mRNA表达变化;Western-Blot法检测Notch1、Notch2、Jagged1、DLL4、c-myc蛋白表达变化。结果:1.HSJ对NB4细胞增殖抑制及诱导分化实验结果:(1)HSJ能够明显抑制NB4细胞的增殖,经HSJ作用48 h后的IC50为60.71μg/mL。(2)Wright-Giemsa染色观察细胞形态,与阴性对照组比较,HSJ组NB4细胞向成熟细胞形态改变,可见核/浆比例减小,核形呈肾形核、分叶核及蚕豆核等形态。(3)透射电镜观察细胞超微形态,与阴性对照组比较,HSJ组NB4细胞胞浆呈空泡状,核仁减小或消失,核形呈肾形或蚕豆形。(4)NBT还原实验测定NB4细胞分化能力,与阴性对照组的NBT还原率(0.93±0.10)%比较,HSJ组(30、60、120μg/mL)NB4细胞的NBT还原率[分别为(15.18±0.38)%、(19.47±1.46)%、(29.71±2.57)%]升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)流式细胞术检测NB4细胞周期实验结果显示,阴性对照组NB4细胞主要分布在S期,占62.15%;其次是G1期,占36.57%;只要少数分布在G2期,占1.28%。而经不同浓度的HSJ处理48 h后,G2期细胞比例呈浓度依赖性上升,而S期细胞比例则相应的减少,差异具有统计学意义(P<0.05)。(6)流式细胞术检测NB4细胞表面分化抗原,与阴性对照组的CD14(51.01±0.38)%比较,HSJ组(30、60、120μg/mL)的CD14阳性细胞表达率[分别为(54.45±1.13、68.19±6.91、84.02±7.99)%]增加,差异具有统计学意义(P<0.05);与阴性对照组的CD11b(69.29±5.08)%比较,HSJ组(30、60、120μg/mL)的CD11b阳性细胞表达率[分别为(80.92±4.09、90.73±8.47、98.17±2.77)%]增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。(7)Real time-PCR检测c-fos mRNA表达变化,与对照组比较,HSJ组(30、60、120μg/mL)NB4细胞中c-fos mRNA表达量[分别为(1.30±0.62、1.53±0.17、2.10±0.63)]升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。(8)Western-Blot法检测c-fos蛋白表达变化,与对照组c-fos[(0.23±0.04)]比较,HSJ组(30、60、120μg/mL)NB4细胞中c-fos蛋白表达量[分别为(0.33±0.06、0.76±0.08、1.12±0.12)]升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.Notch信号通路在HSJ诱导NB4细胞分化中作用的实验结果:(1)Real time-PCR检测Notch1、Notch2、Jagged1、DLL4、c-myc mRNA表达变化,与对照组比较,HSJ组(30、60、120μg/mL)NB4细胞中Notch1 mRNA表达量[分别为(1.27±0.14、1.39±0.23、1.53±0.30)]升高,Notch2 mRNA表达量[分别为(1.80±0.45、2.86±1.02、3.00±0.81)]升高,Jagged1 mRNA表达量[分别为(0.78±0.10、0.32±0.15、0.07±0.02)]降低,DLL4 mRNA表达量[分别为(2.43±0.86、3.28±1.18、4.39±0.57)]升高,c-myc mRNA表达量[分别为(0.88±0.05、0.67±0.02、0.47±0.16)]降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)Western-Blot法检测Notch1、Notch2、Jagged1、DLL4、c-myc蛋白表达变化,与对照组Notch1[(0.16±0.06)]、Notch2[(0.16±0.04)]、Jagged1[(1.28±0.01)]、DLL4[(0.22±0.08)]、c-myc[(1.25±0.01)]比较,HSJ组(30、60、120μg/mL)NB4细胞中Notch1蛋白表达量[分别为(0.56±0.08、0.81±0.03、1.33±0.14)]升高,Notch2蛋白表达量[分别为(0.53±0.05、0.60±0.08、0.85±0.18)]升高,Jagged1蛋白表达量[分别为(0.95±0.10、0.69±0.02、0.59±0.01)]降低,DLL4蛋白表达量[分别为(0.87±0.03、1.23±0.22、1.09±0.07)]升高,c-myc蛋白表达量[分别为(0.82±0.14、0.70±0.07、0.65±0.20)]降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:HSJ能诱导NB4细胞向成熟细胞方向分化,其诱导分化作用可能与Notch信号通路有关。