一、背景与目的肩袖损伤是运动医学中的常见病,在中年老年群体中发病率极高。肩袖损伤产生的疼痛及功能障碍严重地影响了患者的正常生活和工作。目前大部分肩袖损伤都能够通过不同的手术方式来进行修补,然而肩袖再撕裂的发生率仍然很高。间充质干细胞是干细胞的分支,同样具有自我复制更新和多向分化潜能。目前研究发现合理调控间充质干细胞增殖和向肌腱分化可以起到促进肩袖腱骨愈合,提高术后功能、降低再撕裂率的作用。然而愈合后的肩袖生物力学性能仍未达到正常水平,因此仍需对间充质干细胞的调控机制进行更进一步的研究。Pea3是E26转录因子家族成员之一,在多种细胞增殖、迁移和分化中起重要调控作用。在鸡体节发育过程中,肌节分泌的FGF可以通过Pea3诱导骨节中肌腱祖细胞分泌Scx,起到调控肌腱生长发育的作用。Pea3也是肌腱发育重要通路FGF下游的转录因子,同时Pea3可以通过与TGF-β下游的Smad蛋白相结合,加强TGF-β信号通路功能。因此认为Pea3可能是调控间充质干细胞增殖、成肌腱分化中的重要因子。然而,Pea3对间充质干细胞增殖分化的具体作用和机制还未有深入研究。本项目中,我们通过慢病毒构建过表达Pea3的C3H10T1/2细胞,并对其增殖及分化能力的变化进行研究。二、方法与结果我们先利用流式细胞仪验证了C3H10T1/2细胞的表面标志符合间充质干细胞的特征,然后利用慢病毒转染系统构建了过表达Pea3的C3H10T1/2细胞,并使用q RT-PCR和Western blot验证了C3H10T1/2细胞中Pea3的正确表达。通过CCK8、Edu检测发现Pea3的过表达可以提高C3H10T1/2细胞增殖能力。然后通过q RT-PCR分析肌腱系相关因子的表达,实验结果发现Pea3的过表达促进了Col I、Col III、Scx、Tnmd、α-SMA和Vimentin m RNA的表达。接着在Lv-Pea3组细胞中加入了ERK抑制剂SCH772984抑制Pea3的激活,并用Western Blot来验证Pea3对上述肌腱系相关因子蛋白的调控作用,结果发现Pea3的激活可以上调Col I、Col III及Scx的表达,然而对Tnmd蛋白的表达无明显调控作用。最后我们使用FGF2生长因子处理C3H10T1/2细胞,q RT-PCR和western blot结果发现FGF2可以上调Pea3及Scx的表达。三、结论通过上述研究,我们发现转录因子Pea3在C3H10T1/2细胞中的过表达可以促进其增殖;上调肌腱系相关因子Col I、Col III、Scx、Tnmd的表达,起到促进C3H10T1/2细胞向肌腱分化的作用。同时我们发现Pea3可能是FGF调控间充质干细胞增殖分化的机制之一。