论文部分内容阅读
本试验采用30份辣椒种质材料,调查了其平均株高、茎粗、第一开花节位、单果重、果长、果径7个植物学性状和果实特性,运用改良CTAB法提取了辣椒种质材料的基因组DNA,进行了DNA质量和纯度的检测,并利用正交设计对RAPD和ISSR的反应体系进行了优化。用筛选出的12对RAPD引物和11对ISSR引物对基因组DNA进行扩增,并用NTSYS-pc (2.10)软件对其遗传多样性进行了聚类分析。得出的主要结果如下：1、通过对辣椒种质材料7个形态学性状的测量,用SPSS11.5软件将30份辣椒种质材料分为了8大类。2、本试验利用改良CTAB法提取辣椒种质材料的DNA,所提取的DNA质量较好、纯度较高。3、通过正交设计优化建立了适合辣椒种质材料分析的RAPD和ISSR反应体系。RAPD最优反应体系总体积为20μL,其中10×PCR buffer溶液2.0μL、25μmol/L MgCL2溶液1.5μL、2mmol/L的dNTPs溶液2.0μL、10μmol/L随机引物1.0μL、50ng/μL模板DNA1.0μL、2.5U/μL TaqDNA聚合酶0.4μL,并加20μL石蜡油覆盖。PCR扩增程序为94℃预变性3min；94℃变性60S,37℃复性90S,72℃延伸120S,35个循环；最后在72℃延伸10min。ISSR反应体系总体积为20μL,其中10×PCR buffer溶液2.0μL、25μmol/L MgCl2溶液1.5μL、2mmol/L的dNTPs溶液2.0μL、10μmol/L随机引物1.0μL、50ng/μL模板DNA 1.0μL、2.5U/μL TaqDNA聚合酶0.5μL,20μL石蜡油覆盖。扩增程序为94℃预变性3min；94℃变性45S,48℃-56℃复性90S,72℃延伸120S,35个循环；最后72℃延伸10min。4、用NTSYS-pc(2.10)软件对30份辣椒种质材料的RAPD和ISSR扩增图谱进行聚类分析表明：用ISSR引物对辣椒种质材料扩增出的条带遗传多态性明显高于RAPD,即ISSR分子标记更适合用于辣椒种质材料的遗传多样性研究；通过综合比较分析也得出：与RAPD分子标记相比,用ISSR分子标记对辣椒种质材料进行分类更接近于形态学聚类。