论文部分内容阅读
目的： 1.探究P2X3受体在三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的慢性胰腺炎疼痛中的作用； 2.探讨去甲肾上腺素（NE）及其受体在调节胰腺特异性神经元中P2X3受体表达和功能中的作用特征。 方法： 1.对180-200g雄性 SD大鼠的胰管注射 TNBS从而建立大鼠的慢性胰腺炎（Chronic Pancreatitis，CP）模型。运用VFF方法评测CP大鼠的痛行为反应。 2.胰腺壁注射荧光素（DiI）标记胰腺特异性背根节（DRG）神经元，运用全细胞膜片钳方法研究CP大鼠中胰腺相关DRG神经元ATP电流及ATP诱发的动作电位的变化特性。 3.运用Western Blotting方法检测CP模型大鼠胰腺相关DRG神经元中P2X3受体蛋白表达情况。 4.运用ELISA的方法检测血液中去甲肾上腺素（NE）的水平，运用免疫组化的方法检测胰腺相关神经元P2X3，NEβ2受体的表达情况。 5.运用钙成像的方法检测去甲肾上腺素（NE）对ATP诱发的钙信号的调节作用。 结果 1.P2X受体拮抗剂Suramin，P2X2，P2X3受体拮抗剂A317491明显翻转了CP大鼠的胰腺痛觉过敏。 2.与对照组相比，CP增加了胰腺相关DRG（T9-T13）中P2X3受体的蛋白表达量，而P2X2，P2X1受体的蛋白表达量并没有发生变化。 3.给 CP大鼠腹腔连续7天注射去甲肾上腺素β受体的非选择性拮抗剂（Propranolol，PROP）翻转了胰腺相关DRG（T9-T13）中P2X3受体蛋白的高表达，而连续7天注射去甲肾上腺素α受体的非选择性拮抗剂（Phentolamine，PHEN）并没有翻转胰腺相关DRG（T9-T13）中P2X3受体蛋白的高表达。 4.与对照组相比，CP增加了胰腺相关DRG（T9-T13）中NEβ2受体的蛋白表达量，而大鼠血清中NE的水平并没有发生变化。 5.全细胞膜片钳记录显示，与正常组相比，CP大鼠胰腺相关 DRG神经元ATP电流的电流密度显著增大，ATP能够诱发动作电位的细胞数量明显的增多。 6.全细胞膜片钳记录显示，与生理盐水组相比，注射NEβ受体非选择性拮抗剂组的大鼠胰腺相关DRG神经元ATP电流的电流密度显著减小，ATP能够诱发的动作电位的细胞数量明显的减少。 7.在正常大鼠的胰腺相关的DRG（T9-T13）上，NE能显著增强ATP诱导的钙信号。 8.PKA的抑制剂H-89抑制了去甲肾上腺素对ATP反应的增强作用，而PKA的激动剂Forskolin则模拟了NE对ATP诱发的钙信号的增强作用。 9.给CP大鼠腹腔注射去甲肾上腺素β受体的非选择性拮抗剂（Propranolol，PROP）翻转了CP大鼠的痛觉过敏，而注射去甲肾上腺素α受体的非选择性拮抗剂（Phentolamine，PHEN）并没有翻转CP大鼠的痛觉过敏。 结论： 慢性胰腺炎激活了去甲肾上腺素能系统，通过大鼠初级感觉神经元的β受体，调节了胰腺相关DRG神经元中P2X3受体蛋白的表达，从而增加胰腺特异性神经元的兴奋性进而产生胰腺痛觉过敏；β受体介导PKA通路对P2X受体的功能的调节也可能参与了慢性胰腺炎导致的胰腺特异性DRG神经元兴奋性的增加。因此，本研究在一定程度上揭示了慢性胰腺炎病人胰腺痛觉过敏产生的分子机制，从而可能为胰腺痛觉过敏的治疗提供更有效的方案。