尼美舒利对大鼠HSC-T6细胞Rassf1基因表达的影响

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目的探讨Rassf1基因在HSC-T6细胞中的表达及尼美舒利对HSC-T6细胞Rassf1基因表达的影响。方法1.取对数生长期HSC-T6细胞,接种到含有10%小牛血清RPMI-1640培养基中,放入37℃、5%CO2培养箱中培养6-8小时后,分别加入200μmol/L、400μmol/L尼美舒利及单纯的RPMI-1640培养液。每组设3个平行复孔。2.培养第24h、48h、72h后,MTT比色法检测细胞活力;3.培养第48h采用免疫细胞化学法检测HSC-T6COX-2的表达;4. AnnexinV-APC/7AAD的流式细胞术检测HSC-T6的凋亡;5.采用实时荧光定量PCR检测Rassf1mRNA的表达。结果1.免疫细胞化学法检测结果显示,加药后48h三组细胞环氧合酶-2表达阳性率分别为:70.13±2.40%、40.13±4.40%、30.36±5.81%(F=72.982,P<0.01);2.MTT结果显示,400μmol/L尼美舒利处理48h后,HSC-T6细胞的生长出现明显的抑制作用;3.流式细胞术检测结果显示,加药后48h,200μmol/L、400μmol/L尼美舒利处理组HSC-T6细胞凋亡率分别是10.23±1.34,25.23±7.7%,65.87±2.89%,与空白对照组比较,两组差异有显著性(P<0.01);4. RT-qPCR方法检测各实验组Rassf1mRNA表达的水平,400μmol/L尼美舒利处理48h后,HSC-T6细胞Rassf1明显增加(P<0.01)。结论1.尼美舒利对体外培养的HSC-T6细胞具有抑制增殖、诱导凋亡的作用;2.尼美舒利可能通过增强HSC-T6Rassf1基因的表达抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡。
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