阿萨希毛孢子菌顶体和脂筏的观察

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研究目的:  1、观察阿萨希毛孢子菌是否具有与真菌极性生长相关的结构--顶体(Spitzenkorper)。明确顶体及分泌囊泡的特征,初步探讨两者在调控阿萨希毛孢子菌极性生长方面所起的作用。  2、观察阿萨希毛孢子菌是否具有脂筏这一结构。明确其特征,初步分析它在调控阿萨希毛孢子菌极性生长和隔膜形成方面所起的作用。  3、通过药物抑制的方法验证并明确顶体和脂筏在调控阿萨希毛孢子菌极性生长方面的作用。  研究方法:  1、以阿萨希毛孢子菌临床标准株(CBS2479)为研究对象,分别应用FM4-64和Filipin两种荧光染色剂对培养不同阶段的阿萨希毛孢子菌进行特异的荧光染色。  2、在荧光显微镜下观察不同生长阶段以及不同形态下的阿萨希毛孢子菌,运用荧光显微镜数码拍摄系统分别拍摄记录不同状态下的阿萨希毛孢子菌荧光特点。  3、应用不同浓度的两性霉素B、细胞松弛素D作用于阿萨希毛孢子菌,运用荧光染色的方法观察其极性生长的变化,并用荧光显微镜数码拍摄系统分别拍摄记录,以此来分析阿萨希毛孢子菌的极性生长调控机制。  结果:  1.经过FM4-64荧光染色,FM4-64可对阿萨希毛孢子菌菌丝顶端聚集分泌小泡的顶体(Spitzenkorper)结构进行荧光染色而且不同生长阶段、不同的结构上其荧光染色的特点表现各异;  2.经过Filipin荧光染色后,发现阿萨希毛孢子菌菌丝顶端由成簇脂筏组成的细胞膜和隔膜被荧光染色,而且不同生长阶段、不同的结构上其荧光染色的特点表现各异;  3.经过两性霉素B、细胞松弛素D两种药物处理过的阿萨希毛孢子菌形态结构发生异常,荧光染色后与正常的T.asahii荧光染色相比有很大的不同,观察不到顶体(Spitzenkorper)、脂筏这两种结构的荧光,同时菌体内出现散在凌乱的荧光。  结论:  1.阿萨希毛孢子菌具有极性生长的特性,不同生长阶段所表现出的极性特点有所不同而且其极性生长的特性与其他真菌也存在很大差异。  2.阿萨希毛孢子菌菌株中具有与真菌极性生长直接相关的顶体(Spitzenkorper)、脂筏这两种特殊结构,脂筏可能是调控阿萨希毛孢子菌菌丝隔膜形成的关键结构。  3.两性霉素B、细胞松弛素D两种药物都对阿萨希毛孢子菌极性生长产生影响,两性霉素B针对的靶点是阿萨希毛孢子菌的细胞膜上的甾醇;而细胞松弛素D针对的靶点为阿萨希毛孢子菌的负责运送分泌小泡的动力结构--微管,由于两种药物作用的靶点不同,对阿萨希毛孢子菌的极性生长的影响也存在差异,也从另一角度说明了,微管、分泌囊泡、脂筏等结构在阿萨希毛孢子菌的极性生长起着非常重要的作用。  4.阿萨希毛孢子菌假菌丝可以形成顶体,提示其可能形成真正的菌丝,这与之前Helen等所研究的白念珠菌等假丝胞酵母存在差异。本实验只是初步的形态学观察,尚需生理、生化和分子生物学等进一步研究证实。
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