犬出血性肠炎是由犬细小病毒(Canine Parrovirus2，CPV-2)感染引起的一种急性传染病，一旦发病，完全康复非常困难。准确、及时、快速的诊断是临床治疗的前提，也是免疫监测、流行病学调查的主要手段，还是有效控制犬细小病毒感染并降低经济损失的关键。犬细小病毒的核衣壳蛋白2(Capsid protein2，VP2)是犬细小病毒主要的结构蛋白，其编码基因既包括最保守的基因区段，也包括最主要的抗原表位基因区段，因此，VP2基因及其蛋白是检测犬细小病毒及相关研究的首选抗原。　　本研究通过在广州市和深圳市等地区的宠物医院采集疑似CPV感染的犬的血便，经PBS处理后，PCR检测阳性者接种于F81细胞进行分离及进一步的鉴定。PCR检测、血凝试验及间接免疫荧光试验结合细胞培养分离，证明所分离的19个毒株为犬细小病毒；动物回归试验获得与犬细小病毒感染一致的结果，进一步确证其为犬细小病毒。通过克隆VP2基因，核苷酸序列测定，并与国内外不同年代、不同地区的犬细小病毒进行相似性分析，结果表明广州与深圳的CPV的主要流行毒株为new CPV-2a基因亚型，也有CPV-2b和new CPV-2b基因亚型，但无传统的CPV-2和CPV-2c基因亚型。所分离的毒株与已报道的毒株相似性极高，达到98％～99.5％。　　通过比较6种基因亚型VP2基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列，针对主要流行的new CPV-2a亚型选取2组线性表位和2组优势的中和表位，以6个疏水氨基酸(5’-GGC TCC TCC GGC GGT TCC-3’)为桥梁连接，组合成6组表位基因片段；根据表达宿主菌E.coli BL21(DE3)pLysS对三联密码子的偏嗜性进行修饰并合成其序列，然后将这些基因片段分别亚克隆至表达载体pET-32a(+)，构建融合表达质粒pET-32-1、pET-32-2、pET-32-3、pET-32-4、pET-32-5和pET-32-6；转化至表达宿主菌E.coli BL21(DE3)pLysS，并利用IPTG诱导表达。通过SDS-PAGE和Werstern blotting分析，表明6个重组表达质粒均能高效表达目的蛋白；小鼠免疫试验表明6个重组蛋白均能刺激小鼠产生抗CPV的抗体。优化重组表达质粒在E.coli BL21(DE3)pLysS中的表达条件并大量诱导表达，利用His Tap FF亲和柱对表达的重组蛋白进行纯化，使用超滤管对纯化的蛋白进行浓缩和脱盐，获得高纯度的重组蛋白。　　以纯化的3号重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠，200μg/只，共免疫5次，断尾采血并用ELISA测定其血清抗体效价；取血清效价达105或以上的BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在PEG4000的作用下进行细胞融合。用HAT选择培养基对杂交瘤细胞进行培养，利用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞。采用有限稀释法对阳性孔进行亚克隆，重复4次，获得5株能稳定分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株(分别命名为1－E5、2-F6、3－G8、5－C3、5-G8)将阳性杂交瘤细胞注射到BALB/c小鼠腹腔内制备腹水，收获后测得腹水效价达1:105以上。杂交瘤细胞连续培养30代以及冻存3个月后复苏，细胞生长良好，杂交瘤细胞分泌的抗体效价稳定。间接ELISA、间接免疫荧光试验(IFAT)和血凝和血凝抑制试验(HA/HI)检测显示：该单抗腹水均能特性识别6个重组融合蛋白及CPV临床分离株，与犬瘟热病毒和犬副流感病毒无交叉反应。　　本研究通过流行病调查获知广州和深圳的主要CPV流行亚型，针对主要流行亚型构建表达质粒，成功表达出含VP2优势表位的融合蛋白；并以此为抗原免疫小鼠，经细胞融合，获得稳定、特异、高效的单克隆抗体，为犬细小病毒的快速诊断方法的建立及相关研究奠定了良好的基础。