本研究在自构建的马传染性贫血病驴胎皮肤细胞弱毒疫苗株(Fetal donkey dermal-adapted vaccine strain，FDD)感染性分子克隆株PFD3的基础上，又用该克隆株两个衍生的感染性分子克隆株PD9和PD9L2以及马传染性贫血病驴白细胞弱毒(Donkey leukocyte adapted vaccine strain,DLV)和FDD分别接种6匹马和4头驴(D1、D2、D3、D4)，利用套式PCR方法，对接种动物的外周血白细胞的前病毒DNA进行了定期的检测。为鉴定感染性分子克隆毒是否具有与FDD和DLV同样的免疫效果，又对PD9和PD9L2分别接种的4头驴用驴系马传贫强毒(Donkey adapted equine infectious anemia virus，DA-EIAV)进行了攻击试验。同时，又选择了中国EIAV强、弱毒株存在稳定差异位点的囊膜表面糖蛋白基因(env区gp90部分)内的一段区域设计引物，利用套式PCR方法对其进行扩增和序列测定，以检测攻毒的4头驴体内前病毒DNA的存在情况。其结果如下。 通过针对EIAV前病毒DNA的LTR区的特异性套式-PCR扩增反应，发现不论是DLV或FDD，还是PD9或PD9L2，于接种动物后15天在外周血白细胞内都检测到特异性EIAV前病毒DNA的存在。接种3个月后，在部分动物外周血白细胞中的前病毒DNA LTR区检测结果一度为阴性，但随后直到接种后第390天，大部分动物的前病毒DNA LTR区检测呈阳性结果。本研究首次从分子生物学水平上证实了在一定时期内，我国EIAV弱毒疫苗株及其感染性分子克隆衍生毒免疫动物体外周血白细胞染色体内有特异性EIAV前病毒DNA基因的存在。 试验动物攻毒二周后，接种PD9的D1、D2体温有一过性升高的现象。而接种PD9L2的D3、D4在本次试验监测的时间范围内，无任何临床症状的出现。而对照组健康驴在攻毒后第17天发生典型传贫死亡。琼脂扩散实验(AGID)结果表明，D1和D2在攻毒之前P26抗体一直为阴性结果。D3、D4在接种后一个月P26抗体转为阳性，及至第3个月D3转为阴性。在这期间D4一直为阳性反应。6个月后用EIAV-DA强毒攻击后，D1、D2琼扩反应呈现为阳性结果，D3的P26抗体再次转为阳性，D4仍然保持阳性反应。在本试验监测的时间范围内，接种感染性分子克隆衍生毒后6个月攻毒的4头驴均健康存活，该批试验动物目前仍在监测之中。 通过检查外周血白细胞发现前病毒DNAenv区在攻毒后不同时期存在较大的变异，而其编码的氨基酸序列则表现为随着时间的变化而呈现较为规律性变异。在强、弱毒株存在稳定差异的位点处，攻毒后的不同时期各动物的表现不同，但 摘 要一个共同的趋势是最初由完全的强毒特征的序列向弱毒或强、弱毒株共同存在的特征序列转变。在本试验监测的时间范围内，还没有一个动物在最后监测时间点出现将强毒特征序列完全清除出体内的现象。不管如何，所有兔疫动物在观察期内，抵抗了致死剂量EIAV强毒的攻击，虽然在一定时期的前病毒DNA都可被检测到，但所有动物在大部分时间内都表现临床上的健康状态。 本研究首次对接种我国EIAV弱毒疫苗株（DLV和FDD）动物的外周血白细胞内前病毒 DNA的存在情况以及对接种感染性分子克隆衍生毒（PDg和PDgLZ）的动物在攻毒后体内的前病毒DNA成分进行了监测。这将对我国EIAV弱毒疫苗的免疫保护机理的最后阐明提供有意义的借鉴作用。