【摘 要】
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL/Apo2L)是1995年被确认的肿瘤坏死因子超家族成员,在体外和体内,可溶性的TRAIL能迅速地诱导一系
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL/Apo2L)是1995年被确认的肿瘤坏死因子超家族成员,在体外和体内,可溶性的TRAIL能迅速地诱导一系列肿瘤细胞的凋亡,而对正常组织细胞无毒性,因而是一种很有应用前景的抗肿瘤蛋白.采用分批补料的方式发酵重组大肠杆菌C600/pBV-TRAIL生产人可溶性TRAIL蛋白,优化发酵工艺,探索高密度下高表达的方法.在研究重组大肠杆菌C600/pBV-TRAIL生长特性,优化确定发酵培养基基础成分和发酵补料成分配比,确定外源蛋白诱导表达时间条件下,详细研究比较了以往高密度发酵采用的主要补料策略:间歇流加、恒速流加、指数流加,摸索归纳出一种全新的组合流加策略,即指数-恒pH混合流加策略,采用该流加策略有效地避免了发酵过程中,尤其是诱导阶段乙酸的积累,使TRAIL蛋白在高密度培养条件下得到高效表达.菌体密度最终达到65g/L(DCW),可溶性TRAIL蛋白占菌体总蛋白的4.2％,产量为1.4g/L.在整个发酵过程中,乙酸浓度接近于0,克服了乙酸在发酵过程中对TRAIL蛋白表达的严重抑制作用.为TRAIL的工业化生产创造了条件.
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