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乳腺炎是导致奶牛业损失惨重的一种奶牛多发病,该病主要由细菌引起,在牛群中广泛存在。该病病原菌种类复杂,至今仍无满意的结果,目前主要以抗生素治疗为主。抗生素的残留和耐药菌株的出现,造成奶品质下降和治疗难度增加的同时也存在一些潜在的危害,所以迫切需要研究新的预防与治疗方法。各国研究证实,乳腺炎重在预防,研制乳腺炎疫苗控制该病的发生迫在眉睫。本实验主要研究结果如下: 1.在南京地区三个奶牛场调查发现金黄色葡萄球菌是奶牛乳腺炎的最主要致病菌。为筛选金黄色葡萄球菌疫苗株,从53株金黄色葡萄球菌乳样分离株中挑选了培养和形态典型的六株进行生化试验和传代稳定性试验,进一步研究这六株菌的致病性因子,凝固酶、耐药性和溶血效价。为分析金黄色葡萄球菌的致病力,建立了奶牛乳腺炎的鼠关节炎模型,对TQ-1、XG-2、TQ-2和XL-1等四株生化典型、传代稳定、致病因子全面的分离株进行鼠致病力试验,发现XG-2株致病力最强。 2.为筛选抗原谱典型的葡萄球菌菌株,研究了六株金黄色葡萄球菌、两株溶血葡萄球菌、四株腐生葡萄球菌、三株表皮葡萄球菌的菌体蛋白图谱,结果显示金黄色葡萄球菌菌体蛋白条带较多,而其它凝固酶阴性葡萄球菌菌体蛋白条带较少。选取TQ-1、XG-2、TQ-2和XL-1等四株金黄色葡萄球菌免疫兔,制备高免血清,分析四株金黄色葡萄球菌全菌抗原的转印图谱。低剂量活菌免疫小鼠,用建立的全菌包被间接ELISA方法测鼠血清中抗体水平和交叉保护性。筛选到两株具有典型抗原谱,保护性抗原全面的菌株TQ-1和XG-2作为疫苗株。 3.用筛选到的两株金黄色葡萄球菌疫苗株甲醛灭活后,选用合适的佐剂制备金黄色葡萄球菌油乳剂灭活疫苗,经过理化性质鉴定、无菌和安全检验。对小鼠三次免疫后采血,用全菌包被ELISA试验测鼠血清抗体,结果表明采用ISO206作为佐剂制成的奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌油乳剂灭活疫苗物理性状稳定能有效激发小鼠产生抗金黄色葡萄球菌的血清抗体。在鼠关节炎动物模型中,攻毒保护力试验结果显示用