Thd对SLE和RA免疫抑制作用的研究

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目的:探讨沙利度胺(Thd)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T淋巴细胞、SD大鼠滑膜细胞以及RA患者Th17细胞的免疫调节作用。方法:实验分为三个部分(1)第一部分:SLE患者实验部分:分离SLE患者外周血单个核细胞,于24孔平底培养板中,37℃、5%CO2的条件下孵育2h,弃除贴壁细胞,收集细胞悬液。用含10%胎牛血清的DMEM培养液重悬细胞。分组:对照组、DMSO组、5个Thd浓度组:2.5、25、100、300、500μg/ml,培养72h后用MTT比色法检测T淋巴细胞增殖的情况,培养24h后用流式细胞术(FCM)检测T淋巴细胞早期凋亡及CD3+T淋巴细胞CD28表达和CD8+T淋巴细胞CD152表达,培养72h后用Real-time PCR检测T淋巴细胞IL-6、IL-10、TNF-αmRNA水平。(2)第二部分:SD大鼠滑膜细胞部分:选用正常SD大鼠,胶原酶和胰蛋白酶消化法分离培养大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS),传至第3代时加Thd干预。分组:对照组、DMSO组(溶媒组)、Thd组(3个浓度:300、500、800μg/ml)。培养24h后MTT法检测FLS的增殖、Annexin V/PI法FCM检测滑膜细胞凋亡。(3)第三部分:RA患者实验部分:分组:按照疾病活动性评分(DAS)分为RA病情活动组、RA病情稳定组和健康对照组。取RA患者外周血单个核细胞,免疫磁珠阴选CD4+T淋巴细胞,用PMA/Ion刺激,同时加Thd干预6小时,经固定/透膜处理进行细胞内染色,FCM检测CD4+T细胞内IL-17表达水平。结果:(1)在体外,与对照组相比,500μg/ml Thd能抑制CD3+T淋巴细胞CD28表达和促进T淋巴细胞早期凋亡,100μg/ml~500μg/mlThd能抑制T淋巴细胞的增殖,并促进CD8+T淋巴细胞CD152表达,各剂量组均抑制IL-6、IL-10、TNF-αmRNA表达。(2)Thd可抑制FLS的增殖,其抑制作用呈剂量依赖性;Thd能诱导滑膜细胞凋亡,诱导凋亡作用也呈剂量依赖性。(3)经Thd干预后,RA病情活动组、病情稳定组以及健康对照组的外周血CD4+T细胞胞内IL-17的表达均有明显下降,差异有统计学意义。结论:Thd对SLE患者外周血T淋巴细胞、SD大鼠滑膜细胞及RA患者CD4+T淋巴细胞内IL-17表达均表现出免疫抑制作用,有利于逆转自身免疫病患者的免疫失衡,从而有可能达到治疗目的。
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