刺梨籽油的提取、成分分析及其对非酒精性脂肪肝的保护机制研究

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刺梨籽油(seed oil of Rosa roxburghii Tratt,ORRT)是从刺梨种子中提取的,刺梨籽油中含有丰富的不饱和脂肪酸,主要是亚油酸、α-亚麻酸和油酸。本文使用贵州毕节野生刺梨种子作为材料,通过超声辅助提取法提取刺梨种子的油脂,并通过GC-MS对它的脂肪酸种类进行分析。进一步研究了刺梨籽油抑制油酸钠导致的Hep G2细胞中脂质代谢异常和它的分子机制,此外通过小鼠实验研究刺梨籽油对高脂饲喂的小鼠肝脏脂质代谢的影响。本文主要研究成果如下:1.刺梨籽油提取和脂肪酸分析优化了超声辅助提取刺梨籽油最佳提取工艺。最佳提取工艺的参数为:超声功率200 W;超声时间70 min;超声温度45℃;料液比(m L/g)15:1。使用GC-MS分析了刺梨籽油中脂肪酸种类和含量。实验结果表明刺梨种子油有7中脂肪酸组成,主要包括亚油酸(48.33%)、亚麻酸(38.67%)、十六烷酸甲酯(6.12%)、十七烷酸甲酯(2.45%),壬酸甲酯(3.21%)和棕榈酸甲酯(1.13%),其中亚油酸和亚麻酸占峰面积的90%左右。2.刺梨籽油对Hep G2细胞脂质积累的抑制作用本研究采用油酸钠诱导Hep G2细胞发生脂质变性,研究刺梨籽油对NALFD的影响并探讨其机制。实验表明,刺梨籽油可以改善油酸钠引起的脂质积累,氧化应激和炎症反应。同时Western Blot实验显示:刺梨籽油上调了产热发生相关基因的表达,如解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)。上调参与脂肪酸氧化的关键基因(如CPT-1α、ACADL、PPARα)和线粒体生物发生和功能的关键基因(如TFAM、NRF1、PGC-1α和COX IV)表达显著增加。结合改善线粒体膜电势的结果表明刺梨籽油激活了线粒体氧化途径。实验检测了与线粒体功能和脂肪酸氧化密切相关的PPARα/PGC-1α通路。Western Blot实验显示:刺梨籽油激活PPARα和PGC-1α通路,使用PPARα抑制剂的GW6471可以抑制刺梨籽油促进PGC-1α、CPT-1α和ACADL的表达的作用。3.刺梨籽油对高脂饮食小鼠肝脏脂质积累的抑制作用本实验采用高脂饲喂小鼠8周构建小鼠非酒精性脂肪肝的模型。使用125、250、500 mg/kg刺梨籽油作为治疗剂量。实验结果表明:刺梨籽油明显降低高脂饮食引起的体重和肝指数的升高以及血浆中TG、TC、LDL-C、AST和ALT含量的升高。同时升高了血浆中HDL-C的含量。组织切片实验表明与高脂喂养的小鼠相比,刺梨籽油处理组肝脏脂质积累和炎症细胞浸润减少。实验采用了Western Blot检测小鼠肝脏中蛋白的表达情况。实验结果表明刺梨籽油明显提高与线粒体生物发生与功能相关蛋白的表达。同时激活PPARα/PGC-1α信号通路。综上所述,我们优化了超声辅助提取的参数分析了刺梨籽油的脂肪酸成分,并从体内外实验表明刺梨籽油对非酒精性脂肪肝具有保护作用。本研究为刺梨的绿色开发和刺梨籽油功能食品的开发提供理论依据。
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