DNA甲基化是一种真核生物基因组不可缺少的表观遗传学修饰,它特异性地发生在Cp G二核苷酸的胞嘧啶上。曾有报道证实抑癌基因的非正常甲基化状态在许多疾病尤其是癌症中很常见,多与转录抑制有关系。DNA甲基化越来越多地被用作癌症检测和各种诊断的基因标志物。因此,快速、灵敏地检测DNA甲基化是非常必要的。并且,一般情况下,一种癌症会与多个Cp G甲基化相关,因此同时检测多个Cp G甲基化可以大大提高癌症检测的准确性。我们建立了两种基于连接酶链式反应(LCR)高灵敏度检测基因组中DNA甲基化的方法。第一种是LCR反应之后,扩增产物通过与纳米金上两种与产物互补的探针进行杂交反应而使纳米金之间的距离拉近,形成网状结构聚积物进而导致溶液颜色由红色变成蓝色,因此,可以通过可视化检测DNA甲基化并且通过吸收光谱对其进行定量分析。该方法可以检测低至0.01 fmol/L甲基化DNA片段和1 ng甲基化基因组DNA,在大量非甲基化DNA中可以检测到0.1%的甲基化DNA。第二种是在一条LCR探针上标记荧光基团,LCR产物通过ABI 310基因分析仪进行电泳分离和荧光检测。由于LCR可以准确区分单碱基错配,DNA甲基化检测可以获得高灵敏度和选择性。该方法可以检测低至0.01 fmol/L甲基化DNA片段和10 ng甲基化基因组DNA,在大量非甲基化DNA中可以检测出0.1%的甲基化DNA。并且,针对不同目标物,设计一个LCR探针具有不同长度,从而产生不同长度的LCR产物,经过电泳分离之后实现在一个反应体系中多个位点的同时检测。