去氧孕烯炔雌醇对白砂糖依赖的雌性果蝇寿命及免疫基因表达的影响

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研究目的:Hannaaford等调查超过46000名英国女性分析了口服避孕药使用情况与病死和暴力伤害致死之间的关系,也考虑了是否吸烟、生过孩子、病史和社会地位,结果发现在人生某些阶段曾服用避孕药的女性,因疾病死亡的风险较低。Alvergne等人发现,服用避孕药的女性在择偶时变得更加成熟。本论文在研究去氧孕烯炔雌醇对雌性黑腹果蝇寿命影响的基础上,进而探究对果蝇免疫相关基因表达的影响,揭示去氧孕烯炔雌醇与先天性免疫之间的关系。  研究方法:将培养基制成糖浓度分别为0.00/100、1.35/100、2.70/100、4.05/100、5.40/100……43.20/100、48.60/100和54.00/100g/ml共计17组来培养黑腹雌果蝇,每组5管,每管30只处女蝇,计算半数致死时间和存活率。根据不同糖浓度对黑腹雌果蝇的半数致死时间的影响的倒U曲线,建立三个果蝇模型即:半数死亡时间最高的正常糖模型,正糖模型左侧的低糖模型,正糖模型右侧的高糖模型。在三个模型下分别给予0/100、5/100、10/100、15/100、20/100、25/100、30/100、35/100、40/100、50/100和60/100mg/ml的去氧孕烯炔雌醇片刺激,计算半数致死时间和存活率,找到提高果蝇寿命的最佳药物浓度。在此避孕药浓度影响下检测大肠杆菌(OD600=1.0)针刺诱导8h后提取雌性黑腹果蝇抗菌肽基因AttacinDmRNA、CecropinCmRNA、DefensinmRNA、DrosocinmRNA、DrosomycinRNA及转录因子基因RelishmRNA,采用荧光定量PCR检测mRNA的表达水平;检测大肠杆菌(OD600=1.0,OD600=2.0)针刺诱导后,观察78h内雌果蝇的存活率。  研究结果:1.黑腹雌果蝇的寿命与白砂糖浓度成倒U字型相关,其中峰值对应的糖浓度为正糖模型,两边的糖浓度组分别属于低糖模型和高糖模型。2.适量去氧孕烯炔雌醇可以延长各组雌性黑腹果蝇寿命,最佳剂量可以建立相应的寿命内稳态。正糖模型最佳寿命显著高于低糖模型最佳寿命,后者又显著高于高糖组最佳寿命。3.正糖模型去氧孕烯炔雌醇在浓度为25/100mg/ml时可以上调AttacinD、CecropmC、Relish的mRNA的表达(P<0.05),低糖模型去氧孕烯炔雌醇在浓度为25mg/100ml时可以上调AttacinD、CecropmC、Drosocin的mRNA的表达(P<0.05)。4.大肠杆菌的浓度在OD600=2.0时针刺诱导下的果蝇存活率小于OD600=1.0时的存活率,且正常糖浓度下的果蝇抵抗大肠杆菌诱导时的存活率要低于低糖状态。  研究结论:在本实验所用白砂糖-酵母的培养基上可以建立白砂糖依赖的能量限制的果蝇寿命模型;正糖模型处于寿命内稳态,其寿命可以被适量去氧孕烯炔雌醇延长。低糖远离寿命内稳态,适量去氧孕烯炔雌醇可以延长其寿命,最佳剂量还可以建立寿命内稳态。适量的去氧孕烯炔雌醇使果蝇的免疫力也处于内稳态,但是糖和大肠杆菌的浓度对果蝇免疫内稳态的影响要大于去氧孕烯炔雌醇的影响,是更强大的刺激。
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