【摘 要】
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目的:探讨BmNPV-iap2基因对哺乳动物细胞Hela,PC12细胞凋亡作用以及是否会对帕金森病产生的影响。 实验方法:克隆了浙江BmNPV的iap2基因,它与镇江BmNPV的iap2基因、BmNPV-T3的i
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目的:探讨BmNPV-iap2基因对哺乳动物细胞Hela,PC12细胞凋亡作用以及是否会对帕金森病产生的影响。
实验方法:克隆了浙江BmNPV的iap2基因,它与镇江BmNPV的iap2基因、BmNPV-T3的iap2、AcNPV的iap2、RmNPV的iap2相比较具有很高的同源性。并且根据哺乳动物常用的表达载体pcDNA3.1(+)的要求设计了引物,通过PCR扩增得到了抗细胞凋亡基因iap2的DNA片段。将扩增产物克隆到pGEM-T-easy载体上,再进一步将插入片段酶切并连接到表达载体pcDNA3.1(+)上。构建pcDNA3.1(+)-iap2表达载体,再用类似的方法构建pcDNA3.1(+)-EGFP载体。
重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-iap2加pcDNA3.1(+)-EGFP载体共转染的Hela细胞命名为Hela-pcDNAiap2(实验组)。真核表达质粒pcDNA3.1(+)加pcDNA3.1(+)-EGFP的载体共转染的Hela细胞命名为Hela-pcDNA(对照组)。真核表达质粒pcDNA3.1(+)加pcDNA3.1(+)-EGFP的载体共转染的PC12细胞命名为PC12-pcDNA(对照组)。pcDNA3.1(+)-iap2加pcDNA3.1(+)-EGFP载体共转染的细胞命名为PC12-pcDNAiap2(实验组)。亲本细胞PC12作为未转染(空白组)对照。利用一种共转染的方法用脂质体将包含BmNPV-iap2的外源基因转染进哺乳动物细胞中,G418进行稳定筛选后,观察转染后的细胞是否有绿色荧光以确定共转染的成功。
结论:pcDNA3.1(+)-iap2表达载体和pcDNA3.1(+)-EGFP载体能在哺乳动物细胞中表达,转染后的细胞相对于正常细胞对对于抗H2O2引起的细胞凋亡的作用还是有所不同,是否会在治疗帕金森病中起到某种程度的作用有待于进一步的研究证明。
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