【摘 要】
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cDNA的大规模测序一直是发现新基因、揭示基因表达谱的有效手段,而树突状细胞(Dendritic cells,DC)作为体内最强的抗原提呈细胞,也一直是免疫学研究的重点,为了深入了解DC的
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cDNA的大规模测序一直是发现新基因、揭示基因表达谱的有效手段,而树突状细胞(Dendritic cells,DC)作为体内最强的抗原提呈细胞,也一直是免疫学研究的重点,为了深入了解DC的生物学功能及其作用的分子机制,作者通过对人DC cDNA文库的大规模测序,对DC的表达基因谱有了较深的了解,并发现了一百多条新的全长cDNA,其中六十余条具有明显的功能提示,该文选择其中两个具有一定研究价值的新基因:DC来源的热休克蛋白(DC-HSP)基因和DC来源的钙粘着相关蛋白(DC-CAP)基因,对其基因克隆、表达以及相关功能进行初步研究.为了进一步研究DC-CAP的表达和细胞内定位,作者们在pcDNA3.1真核表达载体的Myc/His表位的上游插入在DC-CAP完整编码区(不包括终止码),构建DC-CAP融合表达载体,转染入293细胞中,利用检测DC-CAP-Myc/His的Myc/His标签来研究DC-CAP的表达.用抗His单抗进行Western分析结果表明,在转染细胞的培养上清和胞浆中均检测到DC-CAP印迹,表明DC-CAP可能分泌表达在细胞培养上清中;利用绿荧光蛋白(GFP)作为表达标签是研究蛋白表达定位的常用手段,作者们通过构建GFP-DCAP融合表达载体,将其转染293细胞中,结果在转染细胞的胞浆中也发现GFP-DC-CAP表达,结合生物信息学的分析结果,推测DC-CAP可能不是跨膜蛋白分子,因此可能具有与经典钙粘着蛋白不同的生物学功能,进一步的功能实验研究仍在进行中.
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