胶原支架(SC)分别联合bFGF、MSCs在大鼠脊髓损伤中的应用

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目的:本实验通过建立大鼠脊髓半侧切损伤模型,评价胶原支架(CS)与成纤维细胞生长因子(bFGF)交联对脊髓损伤的修复作用。方法:一、建立大鼠左侧T9脊髓半横断损伤模型:103只健康雄性6周龄SD大鼠随机分为4组:1,假手术组;3,CS移植组;4,CS+bFGF移植组。二、术后每周进行一次BBB评分,分别在术后4周和8周施行足迹分析、组织学检查和以及免疫组化(anti-NF、anti-GFAP)等检查。结果:1.根据排除标准,有7只大鼠因不完全半横断而被淘汰,最后留96只大鼠。生存曲线分析发现CS/bFGF组的生存率远高于对照组与CS组。2.在8周末,CS/bFGF组与CS组的左下肢BBB评分明显高于对照组。然而,各组右侧肢体的BBB评分没有明显差异。3.术后4周和8周施行足迹分析显示,CS/bFGF组的肢体间协调功能比CS组与对照组明显改善。4.4周和8周免疫组化分析可见:CS/bFGF组anti-NF染色密度明显均比CS组与对照组高,而GFAP染色密度最低,表明损伤周围有较多的神经纤维再生,对胶质瘢痕有抑制作用。结论:CS/bFGF植入大鼠脊髓半切损伤模型能够促进轴突的再生,促进肢体功能的恢复。同时也提高了大鼠的生存率。一、大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的制备与鉴定目的:通过体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,观察细胞形态,鉴定表面标记物进行,为修复脊髓损伤提供骨髓间充质干细胞来源。方法:无菌条件下收集幼年SD大鼠骨髓,收集单个核细胞,培养于10%胎牛血清培养液中。使用流式细胞仪鉴定CD29, CD90, CD34和CD45表面标志。以后细胞按常规方法传代、冻存,培养三代后的细胞用于实验研究。结果:原代接种1d即可见较多细胞贴壁。培养至7-9d左右细胞汇合达到80%左右,细胞呈极性排列,集落呈漩涡状。经流式细胞仪检测,MSCs均一地表达CD29、CD90;而CD34、CD45阴性。结论:成功分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞。二、胶原支架(CS)负载MSCs修复大鼠脊髓半切损伤目的:通过建立大鼠脊髓半侧切损伤模型,分析和评价胶原支架负载MSCs修复脊髓损伤后神经功能恢复的效果。方法:一、建立大鼠T9左侧脊髓半横断损伤模型:105只健康雄性6周龄SD大鼠随机分为4组:1,假手术组(n=20);2,对照组(n=30);3, CS移植组(n=31);4,CS+MSC移植组(n=24)。二、术后每周一次BBB评分,分别术后4周和8周行足迹分析、组织学检查和以及免疫组化(anti-NF、anti-GFAP、anti-NSE)等检查。结果:一、10只老鼠因不完全半横断而被淘汰(对照组4只,CS组3只,CS/MSC组3只),最后留95只老鼠。二、CS/MSC组的左后肢功能的恢复较其他组快。在8周末,CS/MSC组与CS组的BBB评分明显高于对照组。三、足迹分析显示,CS/MSC组的肢体间协调功能比CS组与对照组明显改善四、4周和8周免疫组化分析可见:CS/MSC组anti-NF染色密度明显均比CS组与对照组高,而GFAP染色密度最低。结论:植入载有MSCs的CS具有改善局部微环境,修复脊髓缺损、神经保护,促进轴突再生的功能,从而促进肢体功能的恢复。
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