FLAG标记的Kir2.3通道的构建、表达及其对Kir2.3功能的影响

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内向整流性钾离子通道(Inwardly Rectifying K Channel, Kir)是在各种组织中广泛分布的一种钾离子通道,因其电压电流关系中所具有的内向整流特性而得名,即钾离子通过Kir 由细胞外向细胞内流的过程要比由细胞内向细胞外流的过程容易的多~[1]。Kir2.0 钾通道的特征就是具有很强的内向整流特性,这种通道的整流作用有利于维持细胞的静息电位使之接近钾离子的平衡电位并参与复极化过程~[2]。到目前为止发现Kir2.0 家族钾通道在心脏、神经、骨骼肌、肾脏和肺等组织中均有表达~[3],Kir2.3 是Kir2.0 家族中的重要一员,它具有内向整流性钾离子通道的普遍特征:(1)钾离子向内流较向外流容易,在正常生理状态下其反转电位在钾离子的平衡电位-90mV 左右。(2)内向整流性钾离子通道的功能均依赖于一种膜磷脂—PIP2~[4]。(3)内向整流性钾离子通道可以被多种因素调节,各种因素对不同的Kir 通道调节情况不同。(4)Kir 具有共有的基本结构,即:N 末端起始于细胞内,经两次跨膜折叠后,C 末端结束于细胞内~[5, 6]。现已知蛋白激酶C(PKC)的激活可以对Kir 通道的功能(如Kir2.3、Kir3.x 和Kir6.x)产生抑制作用~[7]。PKC 是依赖钙、磷脂(phospholipid, PL)和二酰基甘油(diacylglycerol, DAG)激活的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的多基因超家族,为信号转导中的关键部分,PKC 通过催化多种蛋白质上Ser/Thr
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