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目的:探讨容积敏感性LRRC8A氯离子通道在正常和OA软骨细胞中的表达情况,分析LRRC8A离子通道的激活和表达水平对及II型胶原蛋白表达的影响,为氯离子通道型的抗骨性关节炎药物的研发提供新的实验依据。方法:从患者术后的股骨头和膝关节中提取相对正常的软骨细胞和骨性关节炎的软骨细胞,甲苯胺蓝染色初步鉴定所培养的细胞是否为软骨细胞。通过q PCR和免疫荧光实验比较股骨颈骨折患者和骨性关节炎患者的软骨细胞中COL II和LRRC8A氯通道的m RNA水平。使用氯离子通道阻断剂NPPB、LRRC8A-si RNA和不同渗透压培养液分别处理软骨细胞后,检测COL II和LRRC8A基因的m RNA水平。结果:从患者处获得的软骨细胞甲苯胺蓝染色实验结果为阳性,初步鉴定我们所培养的细胞为软骨细胞。股骨颈骨折患者软骨细胞COL II mRNA和LRRC8A mRNA表达量分别为(1.004±0.082)、(1.002±0.057)。OA患者软骨细胞中COL II、LRRC8A基因m RNA水平分别为对照组的(0.27±0.06)倍、(1.998±0.141)倍。OA患者软骨细胞中COL II基因m RNA表达降低,LRRC8A基因m RNA表达升高,P<0.05,组间差异具有统计学意义。免疫荧光实验中,正常软骨细胞COL II平均荧光强度为(25.877±3.034)A.U,OA软骨细胞中COL II平均荧光强度为(44.663±3.493)A.U,平均荧光强度为正常软骨细胞0.579倍。正常软骨细胞中LRRC8A氯通道的平均荧光强度为(19.16±1.934)A.U,OA软骨细胞中LRRC8A氯通道的平均荧光信号为(54.756±4.772)A.U,为正常软骨细胞2.858倍。NPPB阻断氯离子通道实验中,对照组软骨细胞COL II m RNA表达量为(1.031±0.247),使用工作浓度为100 nmol/L的NPPB阻断氯通道后的软骨细胞中COL II基因m RNA表达明显降低,为对照组基因水平的(0.278±0.054)倍,P<0.05,组间差异具有统计学意义。高渗培养液(441 mOsm/L)培养的软骨细胞COL II、LRRC8A基因m RNA表达量分别为(1.006±0.017)、(1.022±0.202),低渗培养液(160 m Osm/L)培养的软骨细胞COL II基因和LRRC8A基因m RNA水平分别为高渗组的(0.519±0.082)和(1.77±0.117)倍,等渗培养液(300 m Osm/L)COL II基因和LRRC8A基因m RNA水平分别为高渗组的(0.76±0.037)倍和(1.867±0.319)倍,P<0.05,组间差异具有统计学意义。LRRC8A-si RNA转染实验中,对照组软骨细胞COL II、LRRC8A基因m RNA表达量分别为(1.053±0.321)、(1.015±0.182)。使用工作浓度为100 nmol/L的LRRC8A-Si RNA转染后,软骨细胞中COL II和LRRC8A基因m RNA表达明显降低,分别为对照组基因水平的(0.217±0.027)倍和(0.031±0.004)倍,P<0.05,组间差异具有统计学意义。高渗培养液(441 m Osm/L)培养的软骨细胞COL II m RNA表达量为(0.963±0.06),低渗培养液组(160 m Osm/L)、高渗培养液(441 m Osm/L)+NPPB(100 nmol/L)组、低渗培养液(160 m Osm/L)+NPPB(100 nmol/L)组,COL II基因m RNA表达均降低,分别为高渗组基因水平的(0.637±0.09)倍、(0.495±0.092)倍、(0.149±0.137)倍。其中低渗培养液(160 m Osm/L)+NPPB(100 nmol/L)组COL II基因m RNA表达降低较前两组更为明显,P<0.05,组间差异具有统计学意义。结论:1.与关节内的高渗透(441 m Osm/L)压相比,等渗(300 m Osm/L)和低渗(160 m Osm/L)培养下的正常软骨细胞II型胶原的表达明显下降,高渗(441 m Osm/L)培养条件,可能具有保护正常软骨细胞中II型胶原的功能。2.下调LRRC8A氯离子通道可抑制正常软骨细胞中II型胶原的表达。3.抑制LRRC8A氯离子通道进一步促进了低渗透压(160 mOsm/L)对正常软骨细胞的II型胶原的分解代谢。