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胃癌的侵袭性转移是影响患者预后最重要的因素,迫切需要寻找有效的治疗手段。现阶段关于胃癌侵袭性转移的相关基因、蛋白研究已经取得巨大进展,但是胃癌的侵袭转移除了与肿瘤本身的特性有关外,还与机体的免疫功能状态密切相关,这可能是胃癌治疗未取得明显进展的原因之一。本研究拟用能表达增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-C1转染小鼠前胃癌细胞(MFC)株,筛选出能稳定表达增强性绿色荧光蛋白的细胞株,建立小鼠胃癌原位移植模型。运用荧光技术对模型中胃癌的生长及其转移进行观察研究,为进一步运用免疫荧光技术分析胃癌侵袭性转移与机体免疫功能状态变化提供实验依据。
方法:
1.真核表达载体pEGFP-C1的筛选、鉴定、扩增、纯化。
2.应用PolyFect Transfection Reagent将纯化的pEGFP-C1转染入小鼠前胃癌细胞株(MFC)。利用荧光显微镜监测pEGFP-C1在小鼠前胃癌细胞中表达,运用G418试剂筛选能稳定表达pEGFP-C1的小鼠前胃癌细胞株。
3.建立小鼠胃癌原位移植模型,监测肿瘤生长情况及其转移情况,利用荧光显微镜对转移灶及可疑转移灶进行监测。
结果:
1.成功的对真核表达载体pEGFP-C1进行筛选、鉴定、扩增、纯化。
2.体外培养小鼠前胃癌细胞株(MFC),给予转染pEGFP-C1真核表达载体,利用荧光显微镜,证实转染成功,有目的基因表达。
3.通过对成功转染的细胞株进行G418筛选,得到能稳定表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的小鼠前胃癌细胞株(MFC)4.成功建立小鼠胃癌原位移植模型,通过不同时间对小鼠胃癌转移的情况的监测,可以得出小鼠胃癌转移与时间呈正相关。
结论:
EGFP标记基因可以在胃癌细胞内稳定表达,并且不随细胞的分裂而丢失,起到良好的标记作用。由标记基因对胃癌生长进行观察,胃癌的转移与时间呈正相关。