PCR(聚合酶链式反应)是一项体外快速扩增DNA的技术,它可使极微量的某一特定序列的DNA片段在短时间内扩增至原来的数百万倍以上。因此选择特定的扩增引物,PCR能够特异性地扩增目标DNA片段至易检测水平。利用此原理,可以通过特异性地扩增某种微生物的特定基因片段而实现快速检测的目的。本实验利用这一技术,对不同类群放线菌进行快速检测方法研究,获得如下结果:1.通过对GenBank中链霉菌属(Streptomyces)全部580个模式种的16S rDNA序列和非链霉菌属模式菌株的16S rDNA序列进行比对分析,找出两段链霉菌属特征性序列,并利用此序列设计出一对可快速检测链霉菌属菌株的16S rDNA特异性引物。2.利用链霉菌属(Streptomyces)、拟无枝菌酸菌属(Amycolatopsis)、假诺卡氏菌属(Pseudonocardia)、糖丝菌属(Saccharothrix)、小单孢菌科(Micromonosporaceae)和链孢囊菌科(Streptosporangiaceae)6个不同类群的放线菌的特异性引物,进行了快速检测方法的可行性探索。实验采用单因素轮转法对退火温度、Taq酶用量、模板用量和引物浓度4项PCR反应条件进行优化,得到通用的最佳PCR反应体系及反应条件。3.对供试已知菌株和未知菌株的测定结果显示,利用6种放线菌16S rDNA特异性引物进行PCR扩增,均可以得到各自类群的特征性条带,且在其它多个类群的放线菌中不能扩增出相应的条带,说明6种16S rDNA特异性引物具有较强的特异性,能够快速检测出指定类群的放线菌,可以应用于放线菌的快速检测,有助于放线菌的分类鉴定研究。