论文部分内容阅读
高效毛细管电泳(High Performance Capillary Electrophoresis，HPCE)是20世纪80年代初发展起来的一种新型分离分析技术。与高效液相色谱技术相比，毛细管电泳(Capillary Electrophoresis，CE)具有分离效率高、速度快、灵敏度高、所需样品少、成本低等特点。CE的理论和应用研究是分析化学最活跃的领域之一。然而，由于CE进样体积很小以及在柱检测的光程较短，通用型紫外检测器虽然能达到很低的质量检测限，但浓度检测限仍比较高，这使得CE在分离测定实际样品中的痕量组分时受到很大的限制。迄今为止，如何提高CE的检测灵敏度仍然是分析工作者关注的主要问题之一。为了进一步提高CE的检测灵敏度，使其满足分析复杂样品中微量、痕量组分的要求，本学位论文在前人工作的基础上，开展了如下创新性的研究工作：1．首次在胶束电动色谱(MEKC)模式下，运用两种在线富集方法分离测定了枳实中六种黄酮类化合物，并对这两种富集方法进行了系统的比较。首次提出了“水柱辅助阴离子选择电动进样反向迁移胶束扫集”(anion selectiveelectrokinetic injection and a water plug-sweeping with reverse migrating micelles，ASIW-sweep-RMM)的概念。2．采用低pH抑制电渗流的方法，深入研究了反向电压下微乳电动色谱(MEEKC)中的样品堆积和扫集富集方法，并对实验现象进行了合理的理论解释。根据实验现象首次提出了“反向迁移微乳中水柱辅助阴离子选择电动进样堆积”的概念(stacking with anion selective electrokinetic injection and a water plug ina reverse-migrating microemulsion，SASIW-RMME)。3．首次将低温区带和高电导区带分别与MEKC大体积堆积技术相结合，建立了分离测定咖啡中三种酚酸的CE新方法，使检测灵敏度得到了很大的提高。在此基础上，将高电导区带和低温区带两种富集技术联用，进一步提高了检测灵敏度。4．首次建立了以TTAB为阳离子表面活性剂、延胡索乙素为内标在线分离富集测定中草药莲子芯中莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱的MEKC新方法，内标法使待测物测定的准确度得到了显著提高，在线富集方法使其灵敏度得到了很大改善。本论文共分为六章。第一章：简单阐述了CE应用富集技术的必要性，详细介绍了近十年来CE中涌现的在线富集技术及应用，综述了反向电压下新的在线富集方法及应用。第二章：建立了“反向迁移胶束样品堆积”和“水柱辅助阴离子选择电动进样反向迁移胶束扫集”两种在线富集方法，以六种黄酮类化合物为模型化合物，考察了影响分离和富集的主要因素，系统比较了两种富集方法的性能。与常规重力进样相比，两种在线富集方法对六种模型化合物峰高的富集倍数分别为13～16倍和13～31倍。所建立的方法已成功应用于枳实中六种黄酮化合物的测定。第三章：建立了用于MEEKC中的样品堆积和扫集两类富集方法。在样品堆积方法中，提出了“反向迁移微乳中水柱辅助阴离子选择电动进样堆积”的概念(stacking with anion selective electrokinetic injection and a water plug in areverse-migrating microemulsion，SASIW-RMME)，并测定了六种模型化合物在微乳中的保留因子。用扫集富集方法对枳实中六种化合物进行了分离测定。第四章：以十四烷基三甲基溴化铵(TTAB)为阳离子表面活性剂、延胡索乙素为内标，建立了分离测定莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱的MEKC新方法。在最佳条件下，分析物与内标物的峰面积比值与分析物浓度间的线性相关系数(r)分别为0．9997、0．9997和0．9992。该方法大大提高了迁移时间、峰高和峰面积的重现性。将大体积样品堆积技术用于使用阳离子表面活性剂的MEKC模式中，成功地提高了被分析物的检测灵敏度。在最佳富集条件下，莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱峰高的富集倍数可达20倍左右。第五章：将低温区带和高电导区带富集与传统的MEKC大体积进样富集技术相结合，建立了分离测定咖啡中的阿魏酸、氯原酸和咖啡酸的毛细管电泳新方法，使被分析物的检测灵敏度比单纯的大体积进样堆积方法提高了2．1～5．4倍。并考察了高电导区带和低温区带两种富集方法的协同效应。所建立的方法已经成功应用于咖啡中阿魏酸、氯原酸和咖啡酸的测定。第六章：以甲基叔丁基醚为萃取溶剂离线液-液萃取样品、以邻苯二甲酸氢钾为间接紫外背景吸收物质，建立了分离测定自来水中的氯代乙酸和乙酸的CE新方法。并利用中性标记物法和电流突越标记法测定了乙酸和一氯乙酸的电离常数。通过线性回归和非线性回归两种方法对数据拟合得到的电离常数值与文献值基本一致。